【摘 要】
：
大豆（Glycine max（L.）Merrill）是主要的植物蛋白来源,也是主要的油料作物,我国的大豆种植历史悠久,大豆品种众多。我国南方春大豆产区,夏季高温多雨,这种高温高湿的环境影响了大豆种子的发育,导致部分籽粒在田间条件下发生劣变,种子活力出现下降,种用价值下降。本实验室前人对种子劣变抗性品种湘豆3号和不抗品种宁镇1号进行双向电泳筛选到差异表达蛋白GmSBH1,并以其启动子区域顺式作用元件
论文部分内容阅读
大豆（Glycine max（L.）Merrill）是主要的植物蛋白来源,也是主要的油料作物,我国的大豆种植历史悠久,大豆品种众多。我国南方春大豆产区,夏季高温多雨,这种高温高湿的环境影响了大豆种子的发育,导致部分籽粒在田间条件下发生劣变,种子活力出现下降,种用价值下降。本实验室前人对种子劣变抗性品种湘豆3号和不抗品种宁镇1号进行双向电泳筛选到差异表达蛋白GmSBH1,并以其启动子区域顺式作用元件HSE为诱饵,通过酵母单杂交实验筛选到PHD-finger家族转录因子GmPHD3。在此基础上,开展了一系列实验,主要研究结果如下:从湘豆3号和宁镇1号品种的叶片中分离得到目标序列比对结果显示完全一致,ORF全长为738bp,编码246个氨基酸,包含Alfin和PHD-finger两个结构域,与野大豆ALFIN-LIKE 4-like蛋白的亲缘关系最近;亚细胞定位结果显示其在细胞核内表达。GmPHD3基因在湘豆3号成熟的荚中的表达量最高,其次是花、叶和成熟的籽粒,而在宁镇1号中,该基因在花和成熟籽粒中表达量较高;湘豆3号在经过高温高湿胁迫6h时基因表达量最高,显著高于空白对照组,随后开始下降,24 h时基因表达量持续增加,宁镇1号在胁迫168 h时表达量最高,在24h时表达量最低,对胁迫后的大豆胚芽生活力进行检测发现,与空白对照相比,宁镇1号品种胚芽生活力下降的更多;湘豆3号的幼苗在干旱胁迫12h时基因表达量最高,宁镇1号在胁迫6h时基因表达量最高;湘豆3号幼苗在盐胁迫6 h时基因表达量最高,宁镇1号在24 h时基因表达量最高;湘豆3号和宁镇1号幼苗均在ABA诱导24 h时基因表达量最高。构建融合GmPHD3基因的重组表达载体,使用农杆菌介导法转化拟南芥花序,对经过转化后收获的拟南芥种子进行Kan抗生素筛选得到8个候选阳性株系,继续对候选株系进行抗生素筛选至T3世代,同时进行PCR鉴定,确定4个阳性株系,命名为:PHD-1、PHD-3、PHD-4和PHD-6;对拟南芥的生长状况进行观察,在第三周时,转基因拟南芥莲座叶的数量多于野生型;待生长至第六周时,过表达拟南芥比野生型拟南芥分化出更多的分枝;在高温高湿胁迫下,过表达株系的SOD、CAT和POD三种抗氧化酶活性均高于野生型对照,处理组高于对照组;过表达株系中的抗氧化物质MDA含量也低于野生型株系;对胁迫后的拟南芥种子进行标准发芽实验,过表达拟南芥株系的种子发芽率更高,且种子生活力下降幅度小于野生型拟南芥;对种子在逆境下的萌发和幼苗生长进行观察发现过表达株系拟南芥对干旱、盐胁迫和ABA处理的抗性高于野生型株系;拟南芥种子活力测定结果显示:人工加速老化处理后,过表达拟南芥种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数均高于野生型拟南芥;以GmPHD3蛋白为诱饵,对高温高湿胁迫后的大豆籽粒cDNA文库进行筛选,筛选测序得到3个候选蛋白,它们分别为MIEL1（锌离子结合蛋白）、SUVR4（组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶）、PP2C 57-like（蛋白磷酸酶）;通过酵母双杂交回转验证和BiFC实验分别在体内和体外验证了 GmPHD3和GmMIEL1的互作关系,排除了酵母双杂交实验的假阳性,并发现这两个蛋白的互作位置在细胞核内。
其他文献
莴苣菌核病菌（Sclerotinia sclerotiorum）引起的莴苣菌核病是莴苣上发生严重的真菌病害,对莴苣生产造成严重损失。S.sclerotiorum侵染寄主广泛,如油菜、白菜、胡萝卜、大豆及向日葵等重要的蔬菜和油料作物。长期以来,苯并咪唑类杀菌剂如多菌灵和二甲酰亚胺类杀菌剂如菌核净等杀菌剂常被用于菌核病的防治,在田间已经监测到核盘菌多菌灵和菌核净抗性菌株。为此,本文从江苏常熟、无锡、徐
甜菜碱在动物体内可发挥诸多生理功能,例如提供甲基、影响神经内分泌、调节糖脂代谢、抗应激、调节渗透压等,被广泛应用于畜禽养殖业。研究表明,母猪添加甜菜碱可提高胚胎存活率、增加母猪的产仔数、初生窝重,但目前对猪肉品质和肠道微生态影响少有报道。因此,本论文研究了母代饲粮添加甜菜碱和母子代饲粮均添加甜菜碱对子代巴马香猪生长性能、肉品质及肠道微生态的影响,为甜菜碱在地方猪生产中的应用提供依据。选取26头妊娠
果实成熟,是指果实完成生长发育之后,发生一系列生理生化变化过程的集合,这一过程也是影响果实的采后品质以及贮藏时间的关键因素。梨是我国栽培面积最广的果树之一,梨果实因其具有甜美多汁,肉质细腻,皮薄个大等特点,受到消费者喜爱,作为呼吸跃变型水果,梨在成熟过程中会释放大量乙烯从而加快果实成熟,可见,乙烯是梨果实成熟的重要促进因子。人们为了提早或延长果实的成熟期,获得更大的经济效益,通常采取喷施乙烯利、1
随着纳米银（Silvernanoparticle,nAg）类抗菌、消毒产品的广泛使用,nAg可随污水最终排放至城镇污水处理厂,对活性污泥微生物造成毒性胁迫进而影响污水处理厂出水水质。N-乙酰高丝氨酸内酯类（N-acyl homeserine lactones,AHLs）信号分子可根据活性污泥微生物群体中细胞密度变化调控自身基因表达进而调节群体行为。因此,探究nAg胁迫下活性污泥混合液中AHLs变化
哺乳动物卵泡内部缺乏血管分布,导致其内部的卵母细胞和卵丘颗粒细胞处于低氧状态（对人类来说氧气含量大约在1.3%-5%之间）。有研究指出,低氧会影响细胞的组蛋白甲基化水平。组蛋白甲基化作为一种重要的表观遗传修饰,在调控基因表达方面发挥重要作用。卵丘颗粒细胞和卵母细胞作为功能上的合胞体,两者之间的物质交换和信息交流对卵泡和卵母细胞的发育至关重要。卵丘颗粒细胞基因表达的变化会影响卵母细胞的状态和功能。但
可溶性玉米纤维（Fibersol-2）是一种抗性麦芽糊精,在增强动物肠道屏障功能和促进生长等方面具有突出作用。本试验旨在研究日粮中添加Fibersol-2对仔猪生长性能、后肠黏膜屏障功能和微生物多样性的影响。选用28日龄、初始体重为（9.65±0.44）kg的杂交（杜×长×大）仔猪448头,采用单因素随机分组试验设计分为4组,每组8个重复,每个重复14头,分别饲喂4种日粮:基础日粮分别加0（对照组
紫云英（AstragalussinicusL.）在我国南方种植规模较大,其接种相应的根瘤菌后可以高效发挥固氮作用,提高生物产量,增加还田后的改土能力。本文通过选择几种较为常用的紫云英品种与根瘤菌菌种相互接种,比较紫云英与根瘤菌之间的专属性差异,并通过多点取样,对影响紫云英根瘤特性的土壤理化指标进行分析,还通过野外筛选及实验室提取,力求发现并分离纯化高效的紫云英根瘤菌菌株。1.不同品种紫云英接种根瘤
多环芳烃（PAHs）是一种具有强烈“三致”作用的持久性有机污染物,广泛分布于水体、土壤等环境中,可通过土壤-植物系统污染食物链,危害人体健康,因此PAHs对食物链的污染及其阻控受到了人们的高度重视。然而,PAHs在不同生育期作物各器官的分布规律及阻控作用对作物不同生育期的影响目前尚未明晰。本文通过PAHs暴露实验,研究了不同生育期小麦各部位对萘、菲、芘的累积情况,探讨了根向茎、叶、籽粒的迁移以及叶
不结球白菜（Brassica rapa ssp.chinensis）是一种重要的一二年生叶类蔬菜,对人体健康非常有益。它富含多种营养成分和生物活性物质。营养类化合物如维生素、矿物质和膳食纤维,非营养类生物活性化合物如黄酮、花青素、山奈酚和槲皮素等这些生物活性成分。这些化合物对癌症和炎症,老年痴呆症,心血管疾病等多种慢性疾病具有较好的治疗效果。虽然不结球白菜是人们日常饮食中的大宗蔬菜,受广大消费者欢
砷（As）是一种广泛分布于海洋、淡水和土壤环境中的有毒类金属。在自然环境中,砷有多种形态,不同形态的砷毒性不同。将砷从毒性较大形态转化到毒性较小的形态,是生物重要的解毒机制之一。作为海洋和淡水生态系统中的初级生产者,微藻对砷的吸收和解毒过程比较复杂,可能通过藻体表面吸附、亚砷酸盐(As（Ⅲ）的氧化、砷酸盐（As（V））的还原、As（Ⅲ）甲基化、有机砷化物的合成、外排等一系列过程共同作用,同时也受环