广东犬猫中十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的基因型分布特征

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十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)和毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi)是重要的人兽共患病原,可导致人和多种动物腹泻。犬和猫是以上两种病原的重要宿主,但目前国内有关犬猫中两种病原的研究非常有限。因此,本研究采用分子生物学方法,在我国犬猫数量最多的广东省,进行犬猫中以上两种病原的分子流行病学调查,解析两者在犬猫中的流行情况及基因型分布特征,以评估感染风险因素和公共卫生意义。本研究从广东省的研究中心、收容所、宠物医院、宠物商店、家养和流浪犬和猫中,采集了682份犬粪便和424份猫粪便样本,采用巢式PCR结合测序的方法,对采集的犬猫样品进行十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的检测及基因型鉴定。之后,采用卡方检验比较不同年龄、性别、品种和居住条件下犬猫中两种病原感染率的差异,分析感染风险因素。进一步利用多位点序列分型技术(MLST)和群体遗传结构的分析,探究人兽共患毕氏肠微孢子虫种内的遗传多样性以及宿主适应性的存在。结果表明,犬中十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的感染率分别为9.4%(60/641)和31.5%(215/682),猫中两种病原的感染率分别为3.6%(15/418)和3.5%(15/424)。卡方检验结果表明,研究中心的犬(27/201,13.4%)中十二指肠贾第虫的感染率最高,且显著高于宠物医院中的犬(3/109,2.8%)(χ~2=9.223,P<0.05)。毕氏肠微孢子虫在来自研究中心(116/222,52.3%)和收容所的犬(71/140,50.7%)中感染率显著高于家犬(15/82,18.3%)、宠物商店的犬(4/118,3.4%)以及流浪犬(0/13,0.0%)(12.301≤χ~2≤80.549,P<0.05)。6月龄以下的猫中毕氏肠微孢子虫的感染率(6/75,8.0%)却显著高于6月龄以上的猫(8/296,2.7%)(χ~2=4.624,P<0.05)。因此,研究中心和收容所中频繁接触和过于拥挤的环境以及幼龄动物较低的免疫力是毕氏肠微孢子虫感染的风险因素,而频繁接触的环境同时也是贾第虫感染的风险因素。基因型鉴定结果表明,在犬中检测到的十二指肠贾第虫基因型为集聚体C(n=27)、D(n=26)以及5个C和D的混合感染,毕氏肠微孢子虫基因型为PtEb IX(n=212)、WW8(n=2)和Type Ⅳ(n=1);在猫中检测到的贾第虫基因型为集聚体F(n=14)和A(n=1),毕氏肠微孢子虫基因型为Type Ⅳ(n=12)和D(n=2)。贾第虫集聚体A,毕氏肠微孢子虫Type Ⅳ和D均为人兽共患基因型。此外,聚集体C、D和F也在个别人类贾第虫病例中被发现。因此广东犬和猫,尤其是猫具有传播人兽共患贾第虫和毕氏肠微孢子虫的风险。进一步基于ITS、MS1、MS3、MS4和MS7这五个位点,对本研究中发现的毕氏肠微孢子虫人兽共患基因型Type Ⅳ(n=13)和D(n=2)进行了多位点序列分型,共鉴定出12个多位点基因型(MLGs)。进一步结合前人已发表的人、猴、狐狸和貉子中毕氏肠微孢子虫基因型Type Ⅳ和D的MLST数据进行群体遗传学分析,发现基因型Type Ⅳ和D分离株中可形成多个不同的亚群体,而且这些亚群体之间还存在宿主适应性。其中猴子和犬科动物(狐狸和貉子)的分离株分别属于两个完全不同的亚群体,而猫、犬和人源的分离株形成第三个独立的亚群体。以上结果表明,人兽共患的基因型Type Ⅳ和D内可能存在宿主适应性亚群体。研究结果有助于了解广东省犬猫中十二指肠贾第虫和毕氏肠微孢子虫的感染情况和风险因素,从而为制定有效的疾病防控措施提供了帮助。
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