【摘 要】
：
背景:宫颈癌的发病率和死亡率在逐年增加,其发病率和死亡率位居全球第四。宫颈癌的治疗方式多样,随着新型药物的研发问世及给药方法和途径的改善,化疗有望成为治疗宫颈癌的主要手段,化疗可用于宫颈癌的术前或术后,也可与放疗联合治疗。因此新药物的研发对于宫颈癌的治疗是至关重要的。海洋生物碱Rhopaladins可以抑制癌细胞的增殖,是具有重要研究价值的潜在抗癌药物。本课题以Rhopaladins为先导化合物,
论文部分内容阅读
背景:宫颈癌的发病率和死亡率在逐年增加,其发病率和死亡率位居全球第四。宫颈癌的治疗方式多样,随着新型药物的研发问世及给药方法和途径的改善,化疗有望成为治疗宫颈癌的主要手段,化疗可用于宫颈癌的术前或术后,也可与放疗联合治疗。因此新药物的研发对于宫颈癌的治疗是至关重要的。海洋生物碱Rhopaladins可以抑制癌细胞的增殖,是具有重要研究价值的潜在抗癌药物。本课题以Rhopaladins为先导化合物,采用多组分缩合与关环反应串联一锅法一步合成新型Rhopaladins类似物,并研究其对宫颈癌细胞的作用。目的:本研究旨在通过体外细胞实验研究Rhopaladins类似物4-苄叉基-5-吡咯烷酮对宫颈癌细胞系的增殖和凋亡作用以及与PI3K/AKT/mTOR信号通路的相关性。方法:1.通过多组分缩合与关环反应串联一锅法合成新型化合物Rhopaladins类似物2-苯甲酰基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮（RPDP A-C）,并采用MTT法研究新化合物对宫颈癌细胞株CaSki的细胞毒性,确定药物的给药浓度,采用流式细胞术检测RPDPB对CaSki细胞凋亡的影响,以及采用RT-q PCR检测药物对CaSki细胞E6/E7m RNA表达的影响。2.通过分子对接模型对Rhopaladins类似物2-苯甲酰基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮进行结构优化,设计并合成Rhopaladins类似物2-苯乙烯基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮（化合物6）,并计算雷帕霉素和化合物6e分别与雷帕霉素靶蛋白（FKBP12-mTOR复合蛋白）结合的拟合度。3.以顺铂作为阳性对照,通过MTT实验检测化合物6对宫颈癌细胞系C-33A、CaSki、SiHa、HeLa细胞、肝癌Hep G2细胞以及正常肝细胞L02的细胞毒性;采用流式细胞术检测化合物6e对宫颈癌C-33A、CaSki和SiHa细胞凋亡的影响;RT-q PCR检测化合物6e对凋亡因子Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3以及E6/E7 m RNA表达的影响;Western blot检测化合物6e对凋亡因子Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3以及E6/E7和PI3K/AKT/mTOR通路蛋白的影响。结果:1.2-苯甲酰基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮对宫颈癌CaSki细胞的作用实验合成了3个Rhopaladins类似物2-苯甲酰基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮（RPDP A-C）,产率分别为85%、81%、78%;MTT实验结果表明RPDP A-C可以抑制宫颈癌CaSki细胞的增殖;流式细胞术表明RPDPB以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡;PCR实验说明RPDPB可以下调E6/E7 m RNA的表达。2.2-苯乙烯基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮（化合物6）的合成采用分子对接模型对RPDPB进行结构优化,设计并合成了新化合物6a-6j;化合物6e与FKBP12-mTOR复合物的分子对接结果表明,化合物6e的结合能和雷帕霉素与FKBP12-mTOR复合物的结合能类似,化合物6e有望成为雷帕霉素的潜在替代物。3.化合物6a-6j对宫颈癌细胞系的作用MTT实验表明,化合物6e和6j能显著抑制宫颈癌细胞株C-33A、CaSki、SiHa HeLa和肝癌细胞Hep G2的增殖,且对正常肝细胞L02的细胞毒性较低;细胞凋亡结果显示,化合物6e以剂量依赖的方式诱导C-33A、CaSki和SiHa细胞凋亡。RT-q PCR和Western blot实验表明,化合物6e可以下调Bcl-2的表达和增加Bax、p53和Caspase-3的表达,并下调与PI3K/AKT/mTOR通路相关PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白的表达;同时,化合物6e还能抑制CaSki和SiHa细胞中的HPV 16 E6/E7的表达。结论:1.Rhopaladins类似物2-苯甲酰基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮可以抑制CaSki细胞的增殖、诱导细胞凋亡,可能与E6/E7 m RNA的下调有关。2.Rhopaladins类似物2-苯乙烯基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮可以抑制宫颈癌细胞系的增殖并促进细胞的凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT/mTOR通路有关,其明确机制仍需进一步的实验验证。
其他文献
背景:颅内恶性肿瘤约占全部肿瘤的2.66%,位居全部恶性肿瘤发病率的第九位。其中胶质瘤又居于颅内恶性肿瘤的首位。通过影像学如颅脑磁共振可基本明确诊断。显微手术切除是脑胶质瘤治疗最重要的一个阶段,其中手术能否全切,取决于其部位与性质。在保证生命安全、功能保留的情况下,应当尽量全切肿瘤。目的:脑胶质瘤因其浸润性,其真正侵袭边界往往超过术前磁共振T1增强所显示的范围,故全切肿瘤十分困难。神经导航系统是一
背景:肿瘤突变负荷（tumor mutation burden,TMB）已经成为新兴的生物标志物,TMB的负荷量大小为免疫治疗的有效性提供依据。面对不同的癌症种类,TMB有所不同。目前卵巢癌由于缺乏早期的特异性检查指标,且生长位于盆腔深部,故难以发觉。通过探索TMB与卵巢癌的关系,了解卵巢癌的免疫微环境的重要组成及基因表达的特点,从而进一步认识卵巢癌的发生发展机制,找到免疫治疗新的突破口,以缓解患
目的:以前列腺癌细胞研究对象,研究EZH1/2抑制剂和多西紫杉醇（Docetaxe l,DOC）对前列腺癌细胞的影响以及有无协同作用。方法:选用不含内源性雄激素受体,具有侵袭转移能力的PC3细胞株为研究对象,选择EZH1/2抑制剂UNC1999,单独或联合DOC处理PC3细胞,观察不同处理组细胞活性、侵袭和凋亡的改变。由于DOC、UNC1999均溶于二甲基亚砜（DMSO）,故实验设为四组:DMSO
背景:非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）合并多发脑转移患者,其自然生存期短。全脑放疗（whole brain radiation therapy,WBRT）联合局部推量,是非小细胞肺癌多发脑转移患者的重要治疗手段,可延长患者的生存期。但放疗后的放射性脑损伤,如头痛、恶心、呕吐及认知功能障碍等,严重影响了患者的生活质量。目的:观察全脑放疗加局部推量联合重
目的:评估卡培他滨联合奥沙利铂和伊立替康（CAPRINOX）方案与5-氟尿嘧啶/亚叶酸钙联合奥沙利铂和伊立替康（FOLFOXIRI）方案治疗局部晚期或转移性结直肠癌的疗效及安全性。方法:58例符合入组条件的局部晚期或转移性结直肠癌患者,按照随机数字表法分为观察组（CAPRINOX,n=36,q=21d）和对照组（FOLFOXIRI,n=22,q=14d）,每例患者至少治疗2周期。比较两组治疗后客观
背景:随着科学技术的发展和生活水平的提高,屏幕多媒体设备种类越来越多、且越来越广的融入人们的生活,并有意无意间成为婴幼儿生活的一部分。在人们享受屏幕媒体带来的各种好处时,因接触诸如“智能手机、平板、电脑、电视及游戏系统等”而产生的负面影响也日益显现,国内外有少量研究将这种接触称之为“屏幕媒体暴露”[1],并认为屏幕媒体暴露会影响儿童认知、语言及心理行为等方面的发育。小儿孤独症的确诊数在随着医疗技术
背景:缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）是引起婴幼儿神经系统损害的常见致病因素,患儿常出现运动及认知障碍。足够的神经营养支持是治疗HIBD的关键,但目前缺乏有效的神经修复方法,导致越来越多的患儿遗留多种神经系统损害后遗症。近年来干细胞在HIBD的治疗中具有明显的神经营养作用,但具体机制不详。随着研究的深入,发现干细胞的旁分泌机制的重要性,可通过
背景:帕金森病（PD）以脑干含神经黑色素（NM）的儿茶酚胺能神经元进行性坏死为病理特征。根据统一帕金森病评定量表（UPDRS）的震颤评分与僵直评分比值可分为3个不同的运动亚型:姿势步态不稳型（PIGD）、震颤为主型（TD）及混合型（PDM）。识别不同亚型可以帮助了解PD潜在疾病机制、预测预后并最终制定个体化的治疗方案。通过神经黑色素敏感的磁共振成像（NM-MRI）可以检测到原发性PD患者颅内含神经
背景:缺血性脑卒中是各种原因引起脑部血液供应中断致使动脉灌注区域脑组织永久性坏死。近年来,发现巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）可能参与脑卒中的发生发展。但尚未阐明MIF在缺血性脑卒中中的作用机制。目的:探讨MIF对大鼠脑缺血再灌注损伤（I/R）后神经损伤及可能涉及机制。方法:将42只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R）和MIF抑制剂ISO-1处理组（ISO-1）。利用大脑
目的:探讨MG患者调节性T细胞线粒体自噬异常的分子机制,为探索新的MG特异性治疗途径提供理论依据。方法:（1）研究对象选择与处理:选取15例临床确诊的MG患者,抽取外周血30m L,通过密度梯度离心法分出单个核细胞,然后再用CD4+CD25+Treg分离试剂盒从PB MC中分离出Treg细胞。将MG患者的Treg细胞分为不做任何处理的对照组、经CC CP处理培养组、经Cs A处理培养组、经CCCP