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目的1.分析抗纤软肝颗粒（KXRG）防治慢性乙型肝炎（CHB）相关肝硬化IETM的临床疗效,为KXRG防治肝硬化IETM提供临床循证依据。2.通过细胞模型和动物模型实验,从LPS-TLR4信号转导通路研究KXRG在改善肝硬化IETM中发挥的作用及相关的分子机制。方法1.采用文献研究方法,探讨现代医学和中医学对肝硬化IETM的最新研究进展,为KXRG治疗肝硬化IETM提供理论依据。2.采用临床回顾性对照研究的方法,分析KXRG防治CHB相关肝硬化IETM的临床疗效。通过医院电子病历系统采集2018年1月至2021年12月就诊于湖北省中医院花园山院区和光谷院区住院部的患者信息,收集符合纳入标准的确诊CHB相关肝硬化,且经过一线核苷（酸）类似物抗HBV治疗后HBV DNA持续阴性的病例,根据医嘱中是否服用KXRG分为KXRG组和对照组。两次观察时间节点距离为6个月,比较两组患者治疗前后APRI模型评分、FIB-4模型评分、Child-Pugh分级评分、血清肝纤维化、炎症相关指标和肝脏弹性检测值。3.细胞实验:先用CCK-8法确定KXRG的给药浓度,检测所选浓度对正常Ana-1细胞TLR4信号通路的影响;然后采用LPS刺激Ana-1细胞建立肝硬化巨噬细胞炎症模型,通过q RT-PCR和Western Blot法检测不同浓度KXRG对模型细胞TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子表达水平的影响,同时用ELISA法检测细胞培养基上清中IL-1β、IL-6、TNF-α含量;采用siRNA和慢病毒载体将Ana-1细胞的TLR4分子表达分别进行了下调和上调,重复上述造模和给药,通过q RT-PCR和Western Blot法检测不同浓度KXRG对下调和上调模型细胞TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子表达水平的影响。4.动物实验:用CCl4加乙醇诱导肝硬化IETM动物模型,按3.125g/kg/d的剂量采用灌胃的方式给予KXRG水溶液。观察大鼠体重增长情况、肝脏指数、脾脏指数、血清生化指标。通过q RT-PCR和Western Blot法检测大鼠肝脏组织中TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子表达水平的影响,同时用ELISA法检测血清中LPS、IL-1β、IL-6和TNF-α水平。通过HE染色和Masson染色观察大鼠肝脏组织病理学变化。结果1.临床研究结果:共收集到病例85例纳入本次研究,其中KXRG组46例,对照组39例。两组患者在性别、年龄、既往病程等方面均无统计学差异,具有可比性（P＞0.05）。（1）治疗前,两组患者的APRI、FIB-4和Child-Pugh评分均无统计学差异。治疗后,KXRG组与治疗前组内对比,3项评分均得到改善,与对照组组间对比,也明显降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;对照组与治疗前组内对比,3项评分均较前有所降低,但差异均不具有统计学意义（P＞0.05）。（2）治疗前,两组患者的血清肝纤维化四项指标均无统计学差异。治疗后,两组患者与治疗前组内对比,4项指标均得到改善（P＜0.05）,但是KXRG组改善程度更为显著,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。（3）治疗前,两组患者的血清CRP、PCT、IL-6和LPS均无统计学差异。治疗后,两组患者与治疗前组内对比,4项指标均得到明显改善,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,但是KXRG组改善程度更为显著,差异具有统计学意义（P＜0.05）。（4）治疗前,两组患者LSM值无统计学差异（P＞0.05）。治疗后,KXRG组与治疗前组内对比,LSM值明显降低,与对照组组间对比,也明显降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;对照组与治疗前组内对比,不具有统计学差异（P＞0.05）。2.实验研究结果实验一:KXRG在Ana-1细胞系上对LPS激活的TLR4信号通路的影响（1）KXRG对Ana-1细胞的最大无毒浓度:CCK-8法检测结果分析显示,给药浓度在0.25-2.0 mg/mL范围之间时,KXRG对Ana-1细胞存活率均无明显影响。2.0、1.0、0.5 mg/mL三个浓度的KXRG对正常Ana-1细胞TLR4、TRAF6的mRNA的转录水平与空白对照组比较无统计学差异（P＞0.05）。（2）LPS刺激Ana-1细胞后,模型组细胞中TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子的mRNA及蛋白表达均较空白对照组升高,而在给予KXRG干预后,与模型组相比,表达量明显降低（P＜0.05）。同时,模型组细胞培养基上清中的IL-1β、IL-6、TNF-α含量均较空白对照组均显著上升（P＜0.05）,KXRG各组均较模型组显著下降（P＜0.05）。（3）在siRNA-TLR4成功转染Ana-1细胞后,用LPS刺激细胞造成炎症模型,再用KXRG进行干预。结果发现模型组（siRNA-TLR4+LPS）细胞中TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子的mRNA及蛋白表达均较siRNA-TLR4组显著升高（P＜0.05）,而在给予KXRG干预后,表达量明显降低（P＜0.05）。（4）在Lentivirus-TLR4成功转染Ana-1细胞后,用LPS刺激细胞造成炎症模型,再用KXRG进行干预。结果发现,LPS刺激细胞后,模型组（Lentivirus-TLR4+LPS）细胞中TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子的mRNA及蛋白表达均较Lentivirus-TLR4组显著升高（P＜0.05）,而在给予KXRG干预后,表达量明显降低（P＜0.05）。实验二:KXRG对肝硬化大鼠肝脏中TLR4信号通路的影响（1）KXRG对大鼠一般情况的影响:造模2周后大鼠每周体重平均增幅受到抑制,KXRG组大鼠干预5周后体重平均增幅开始大于模型组（P＜0.05）。模型组与空白对照组相比,肝脏指数明显升高（P＜0.05）;KXRG组与模型组相比,肝脏指数下降（P＜0.05）;模型组、KXRG组与空白对照组相比,脾脏指数明显升高（P＜0.05）;KXRG组与模型组相比无统计学差异（P＞0.05）。（2）KXRG对大鼠血清生化指标的影响:与空白对照组相比,模型组血清ALT、AST、ALP、TBA水平显著上升（P＜0.05）,而血清Alb的水平显著下降（P＜0.05）;与模型组相比,KXRG组血清ALT、AST、ALP、TBA水平显著下降（P＜0.05）,而血清Alb的水平显著上升（P＜0.05）。（3）KXRG对大鼠血清中LPS及炎症因子的影响:与空白对照组相比,模型组血清LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP水平均显著上升（P＜0.05）;与模型组相比,KXRG组血清LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、CRP水平显著下降（P＜0.05）。（4）与空白对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中TLR4信号通路上的相关分子的表达均明显升高（P＜0.05）;与模型组相比,KXRG组大鼠肝脏组织中TLR4及其下游Myd88、TRIF、TIRAP、TRAF-6、ERK、NF-κB分子的mRNA及蛋白表达量明显降低（P＜0.05）。（5）KXRG对各组大鼠肝脏组织病理学的影响:HE染色对比发现,KXRG组较模型组细胞脂肪变性明显减轻,炎性细胞浸润减弱,肝小叶结构破坏减少。Masson染色对比发现,KXRG组与模型组比较,肝组织蓝色胶原纤维沉积明显减轻,未见明显假小叶。结论1.KXRG可有效改善CHB相关肝硬化IETM患者模型评分、肝纤维化和硬度指标,同时对内毒素血症及其引起的肝脏炎症反应具有一定调节作用。2.KXRG对LPS激活的巨噬细胞TLR4信号通路有明显抑制作用,抑制效率与KXRG浓度呈正相关,其药理作用具有选择性,能够抑制病理过程,同时又不影响正常细胞。并且,KXRG针对该通路上的靶目标可能是TLR4分子。3.KXRG通过抑制肝硬化IETM模型中肝脏巨噬细胞TLR4及其下游分子的过表达,使之介导分泌的IL-1β、IL-6和TNF-α等促炎因子释放减少,减轻了局部炎症反应,从而延缓了肝硬化肝纤维化的进展,同时对IETM起到了很好的预防作用。