蝴蝶兰离体培养与抑制组培褐变的研究

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蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)是国内外最受欢迎的洋兰之一,市场前景十分广阔。组织培养是蝴蝶兰最主要的繁殖方式,而组培褐变严重影响了组培诱导率和增殖系数。本试验以9个蝴蝶兰品种的花梗及无菌苗叶片为外植体,研究了不同蝴蝶兰品种间不定芽诱导率以及增殖系数的差异。在此基础上,选出增殖系数高、中、低的3个代表品种‘万花筒’、‘梦幻兄弟’和‘内山姑娘’,采用L9(33)正交设计对不定芽增殖条件进行了优化。并以组培过程中褐变严重的品种‘内山姑娘’的无菌苗叶片为试材研究了热激处理、水杨酸处理以及热激结合水杨酸处理对蝴蝶兰组培褐变的影响。结果表明:1.相同培养条件下,9个不同蝴蝶兰品种间不定芽诱导率和增殖(分化)系数存在显著差异,且花梗芽诱导率和繁殖系数高的品种,叶片的不定芽诱导率和分化系数一般也较高。6-BA是影响蝴蝶兰不定芽增殖的主要因素,椰汁次之。培养基1/2MS+6-BA7.0mg L-1+NAA0.2mg L-1+椰汁100mL L-1适于‘内山姑娘’和‘梦幻兄弟’品种的不定芽增殖,1/2MS+6-BA5.0mg L-1+NAA0.2mg L-1+椰汁50mL L-1适合‘万花筒’品种的不定芽增殖。9个蝴蝶兰品种在生根培养基(1/2MS+0.5mg L-1NAA+1g L-1活性炭)上的生根率均达90%以上。2.40℃热激处理9min恢复48h后再切割接种能够显著减轻‘内山姑娘’叶片的褐变程度,热激处理后叶片组培过程中的褐变指数、总酚含量以及苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著低于对照,且三者两两之间具有极显著正相关关系,证明短时间的热激处理可降低酚合成酶PAL的活性,减少酚类化合物的积累,从而减轻组培过程中的褐变伤害。3.将不同浓度的水杨酸(SA)添加于培养基中并观察叶片的褐变情况,筛选出SA的安全使用浓度为00.2mmol L-1。0.05、0.1和0.2mmol L-1的SA处理均可降低蝴蝶兰叶片褐变过程中的褐变指数、总酚含量和PAL活性,提高SOD、POD和CAT活性。0.1mmol L-1的SA处理抑制外植体褐变的效果最好。4.热激处理(40℃,9min)和水杨酸处理(SA,0.1mM)单独或结合使用均能够显著降低蝴蝶兰叶片的褐变指数、总酚含量、PAL和PPO活性并显著提高SOD、CAT、APX活性和叶片诱导率。热激(40℃,9min)与水杨酸(0.1mM)协同作用对于抑制蝴蝶兰组培褐变的效果最好。
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