【摘 要】
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猪圆环病毒(Porcinecircovirus，PCV)是圆环病毒科圆环病毒属成员，分为Ⅰ型(PCV1)和Ⅱ型(PCV2)两个型，其基因组为共价闭合环状的单链DNA，大小约1.7kb。猪圆环病毒ORF2基因编码病毒
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猪圆环病毒(Porcinecircovirus，PCV)是圆环病毒科圆环病毒属成员，分为Ⅰ型(PCV1)和Ⅱ型(PCV2)两个型，其基因组为共价闭合环状的单链DNA，大小约1.7kb。猪圆环病毒ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白Cap蛋白，该蛋白具有良好免疫原性。PCV1和PCV2ORF2基因序列的核苷酸同源性仅为67％，两种血清型的Cap蛋白虽存在共同的抗原决定簇，但两者没有抗原交叉性，因而是区分PCV1和PCV2的重要蛋白。PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)等相关疾病的主要病原。给世界养猪业造成巨大的经济损失。了解PCV2的流行情况，可以给PCV2的预防和控制提供指导。
根据已测猪Ⅱ型圆环病毒湖南分离株(HN0712)全基因序列，设计一对克隆和表达HN0607株ORF2全基因(709bp)的引物，将其克隆到原核表达载体pET-32a上，经KpnⅠ、XhoⅠ酶切，序列测定正确后，将重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21中，用终浓度1mmol/LIPTG诱导，表达产物以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在。经Western-blot检测表明，表达的重组蛋白ORF2能被PCV2阳性血清所识别，具有良好的抗原性。
用镍柱亲和层析法从上清中纯化目的蛋白，以纯化后的目的蛋白作为抗原包被聚乙烯微量反应板，初步建立检测PCV2抗体的间接ELISA方法。试验表明:抗原的最佳包被浓度为12.81μg/mL，血清最佳稀释度为1∶20;最佳封闭液为3％BSA，封闭时间为37℃1.5h加4℃过夜，HRP-鼠抗猪IgG的最佳工作浓度为1∶12000，最佳血清及酶标二抗反应条件及时间均为37℃30min，最佳显色时间为15min，统计学分析后确定阴阳性的临界值为0.490。通过上述建立的ELISA方法有良好的特异性，重组蛋白不与猪瘟，猪伪狂犬病，猪繁殖与呼吸综合征病毒的阳性血清发生交叉反应。该方法为我国进行PCV2的快速诊断和血清学调查提供了一种监测手段，为试剂盒的研制和开发奠定了前期工作基础。
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