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目的:我国胰腺癌发病率和死亡率高,总体预后差;亟需开发新型药物或优化现有的化疗药物应用,以延长患者生存。本研究旨在评价尼妥珠单抗在体内外抑制胰腺癌细胞生长的效应,以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达及鼠类肉瘤病毒癌基因(kristen rat sarcoma viral oncogene,KRAS)突变状态对尼妥珠单抗疗效的影响,并初步探索尼妥珠单抗抑制胰腺癌细胞生长的潜在分子机制。方法:1)蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)、免疫细胞化学染色技术(Immunocytochemistry,ICC)及基因测序法检测6株胰腺癌细胞株EGFR表达及KRAS基因突变状态。2)CCK-8细胞增殖实验及流式细胞术检测经尼妥珠单抗处理后,胰腺癌细胞体外增殖、细胞周期及凋亡情况;酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测经尼妥珠单抗处理后,胰腺癌细胞培养上清液中表皮生长因子(EGF)及白介素6(IL-6)表达情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测EGFR信号通路分子(EGFR、pEGFR、pErk、pAKT)表达及活性变化。3)构建裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射给予尼妥珠单抗,以生理盐水为对照组,绘制肿瘤生长曲线。眼球采血法收集小鼠外周血,ELISA检测外周血中EGF及IL-6水平;PCR法检测裸鼠移植瘤组织中IL-6 mRNA水平;Western Blot检测裸鼠移植瘤组织中EGFR、pEGFR、pErk、pAKT、IL-6表达情况。结果:1)筛选出EGFR高表达、KRAS野生型的BxPc3细胞株,EGFR低表达、KRAS突变型的Panc-1细胞株,及EGFR高表达、KRAS突变型的Patu-8988细胞株。2)体外增殖试验中,尼妥珠单抗与PBS分别处理胰腺癌细胞株后,细胞体外增殖能力无明显差异(P>0.05);细胞凋亡率及细胞周期亦未见明显差异(P>0.05)。3)裸鼠皮下移植瘤实验结果显示,在BxPc3、Patu-8988细胞中,尼妥珠单抗组裸鼠皮下移植瘤体积明显小于对照组(第4周,尼妥珠单抗组比对照组的肿瘤体积:BxPc3细胞:51.05±18.59 mm~3比108.35±30.43mm~3,P<0.05;Patu-8988细胞:103.86±31.64mm~3比326.67±142.35mm~3,P<0.05)。在Panc-1细胞中,尼妥珠单抗组与对照组相比无明显差异(第4周肿瘤体积:1992.01±1406.50mm~3比1988.82±1359.26mm~3,P>0.05)。4)ELISA检测结果显示,相比PBS处理组,尼妥珠单抗处理后胰腺癌细胞培养上清中EGF及IL-6水平无明显改变(P值均>0.05)。在裸鼠外周血中,尼妥珠单抗组EGF水平较对照组均明显下降(尼妥珠单抗组比对照组:BxPc3细胞:52.18±3.20pg/ml比185.54±5.32pg/ml,P<0.05;Panc-1细胞:49.31±6.16pg/ml比80.21±2.30pg/ml,P<0.05;Patu-8988细胞:220.21±7.13pg/ml比239.59±11.02pg/ml,P<0.05)。尼妥珠单抗组IL-6水平在BxPc3细胞中较对照组明显下降(29.87±1.80pg/ml比46.46±26.73pg/ml,P<0.05),在其余两株细胞则未见明显差异(P>0.05)。5)Western Blot结果显示,在体外,经尼妥珠单抗处理后,BxPc3细胞pEGFR表达上调,而Panc-1及Patu-8988细胞pEGFR表达无明显变化。3株胰腺癌细胞中EGFR、pErk、pAKT及IL-6表达在尼妥珠单抗处理后均无明显变化。体内实验结果显示,尼妥珠单抗可降低BxPc3及Patu-8988细胞移植瘤组织中EGFR及IL-6表达,而Panc-1细胞移植瘤组织中EGFR及IL-6表达无明显改变。尼妥珠单抗对三种胰腺癌细胞移植瘤组织pEGFR、pErk、pAKT表达的影响存在差别,用药后,BxPc3及Panc-1移植瘤组织pEGFR、pErk、pAKT表达上调,而Patu-8988移植瘤组织中上述蛋白表达下调。结论:尼妥珠单抗抑制胰腺癌细胞体内增殖与细胞EGFR表达程度相关,而与细胞KRAS基因状态无明显相关。IL-6表达下调可能参与尼妥珠单抗抑制胰腺癌细胞体内增殖。