Parkin在Cr(Ⅵ)诱导的鸡肝细胞线粒体自噬中的作用

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:durrenchen
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
铬是最常见的重金属污染物之一。在自然环境中,铬的价态从-2到+6价不等,其中三价铬(Cr(Ⅲ))和六价铬(Cr(Ⅵ))是最常见的价态,以Cr(Ⅵ)的毒性最大。Cr(Ⅵ)为吞(吸)入性毒物,经过消化、呼吸道、肌肤及粘膜侵入机体,很容易被机体吸收,可与细胞内的还原物质发生反应,使细胞内的活性氧无法被及时清除,引起线粒体损伤、细胞遗传物质损伤等症状的发生。近年来,人们逐渐认识到重金属铬污染的巨大危害性,但对其致病机理的研究仍不够深入。本课题组前期已对Cr(Ⅵ)致鸡肝细胞线粒体自噬进行了体内验证,但其调控机制尚不清楚。因此,本试验建立鸡肝细胞Cr(Ⅵ)的中毒模型,确定Cr(Ⅵ)引起的线粒体损伤与线粒体自噬之间的关系,阐明Parkin在Cr(Ⅵ)引起的线粒体自噬中的作用。本试验使用鸡肝原代细胞构建Cr(Ⅵ)的体外中毒模型,并分别设立CCCP(羰基氰化物氯苯腙)处理的阳性对照组、Hank’s处理的饥饿处理组、空白对照组和Cr(Ⅵ)处理组来进行试验。首先,通过Western Blot检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达变化,筛选出Cr(Ⅵ)的最佳处理时间和浓度;再通过激光共聚焦技术和流式细胞术对鸡肝原代细胞内的MMP和ROS分别进行定性和定量检测,进而验证Cr(Ⅵ)可以通过损伤线粒体引起细胞线粒体自噬的发生。随后,为了进一步探讨Parkin在Cr(Ⅵ)诱导的鸡肝细胞线粒体自噬中的作用,本试验使用鸡肝癌细胞系(LMH)构建Parkin沉默模型,设立空白对照组、NC阴性对照组(si RNA空载体组)、Cr(Ⅵ)处理组和si RNA+Cr(Ⅵ)共处理的Parkin沉默组。通过流式细胞术和Western Blot验证Parkin被有效地沉默;检测线粒体自噬相关蛋白PINK1、p62和LC3含量变化;使用激光共聚焦技术观察线粒体形态变化并对MMP和ROS变化进行检测,进一步阐明Parkin沉默对Cr(Ⅵ)诱导的线粒体自噬产生的影响。试验结果表明:40μM Cr(Ⅵ)处理鸡肝原代细胞6 h后,自噬相关蛋白LC3和p62的蛋白表达量变化最为显著。在此浓度与时间下,Cr(Ⅵ)处理组会引起ROS的大量积累以及MMP的显著下降,线粒体自噬相关蛋白(PINK1和Parkin)表达明显上升。另外,Parkin的敲低有效地阻碍了鸡肝癌细胞中p62降解、LC3脂化以及PINK1的表达,线粒体自噬受到抑制;在Parkin沉默组中,线粒体形态发生剧变,碎片化严重;ROS大量积累,MMP进一步下降,线粒体损伤加重。总之,本试验表明Cr(Ⅵ)可以通过损伤线粒体引起线粒体自噬的发生,而Parkin在Cr(Ⅵ)诱导的鸡肝细胞线粒体自噬中发挥了关键作用。本试验进一步阐明Cr(Ⅵ)对肝脏的毒理作用,为今后进一步研究Cr(Ⅵ)毒性作用提供了理论基础;此外,了解Parkin在线粒体自噬中发挥的作用对于研究相关疾病发病机理及防治手段具有重要意义。
其他文献
薄膜热电偶是一种新型温度传感器,因其响应速度快、测量精度高、对被测环境影响小等优点,被广泛应用于航空航天、军火和化工等领域的温度检测,特别是航空发动机涡轮叶片、燃烧室内壁、枪膛等高温关键部位的测温。薄膜热电偶在研发和使用的过程中需要进行检定和校准,获得温度和电势的关系,从而保证其测量精度。国内外的检定校准设备大多是科研工作者根据需求自行搭建,存在温场均匀性差、温度波动度大、可靠性低等问题,导致薄膜
学位
土壤盐渍化一直是全球性的资源和生态问题,习总书记强调:“端稳中国粮,盐碱地大有可为”,而快速、准确地获取土壤盐分含量及其空间分布信息是综合治理利用盐渍土的前提。遥感是当前监测土壤盐渍化信息的重要手段,其中基于单一传感器的土壤盐分信息定量分析精度和稳定性有待提高,基于多源遥感融合高精度、快速率反演区域土壤盐分,既是盐渍土治理利用的现实需求,也是土壤盐渍化定量遥感发展的主要趋势。本文以黄河三角洲垦利区
学位
期刊
全面加强老龄健康及政策研究是推动老龄健康政策创新、优化老龄健康资源配置、有效应对和解决老龄健康问题的重要手段,对于建设健康中国和实施积极应对人口老龄化国家战略具有重要意义。研究发现,中国在老龄健康及政策研究方面已经形成了一些共识。多数研究认为,中国老龄健康形势依然严峻,老龄健康资源分布不均,老龄健康理念发生了重要转变。相关研究既取得了积极进展也有明显不足。未来应进一步加强老龄健康政策理论、政策实践
期刊
学位
期刊
脂肪肝是奶牛围产期常发的一种营养代谢性疾病,其发病原因主要与脂肪过度动员、胰岛素抵抗(IR)等相关。胰岛素通过与细胞膜上的胰岛素受体(INSR)结合后引发级联反应,发挥其生物学作用。已有研究表明,IR可能是奶牛脂肪肝发病过程中的中心环节。因此,深入研究INSR及胰岛素信号通路在脂肪肝奶牛糖脂代谢中的作用机制对防治奶牛脂肪肝尤为重要。miRNA可以通过分解靶基因的m RNA或阻碍m RNA翻译来调控
学位
增值税是我国的第一大税种,贡献了部分财政收入。我国实施增值税已经几十年了,但一直都是多档税率,把超过当期销项税额的进项税额进行结转,抵扣下期的销项税额,不对企业期末的增值税留抵税额进行退还。毫无疑问,这样做必然会累计大量的留抵税额,从而使得企业当期的现金流量变小。在当前的百年未有之大变局下,我国实行积极的财政政策,留抵退税制度是我国完善增值税体制的不断尝试,是我国深入实施减税降费政策的体现,对相关
学位
期刊
在社会显现多元化的态势下,伴随着现代科学技术的进步,数字化设计己经日益被运用到当代艺术设计中。固有传统文化的传播方式已难以满足传播的需要,数字化在传统文化中的传播应用成为改善这一现状可行性路径。数字灯光艺术作为一种以光为基本语汇的独特表现形式,给当代艺术带来了全新的表现力。将数字灯光艺术运用到传统文化传播路径中,不仅可以体现特定历史年代的当代性特点,还具有主体性意识,是内容在新时代得以传播的途径。
学位