【摘 要】
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骨骼肌损伤在运动医学领域十分常见,是较难处理的运动损伤.骨骼肌损伤后再生能力有限,自然愈合质量不可靠,易发生再次损伤,严重影响了肌肉运动功能.研究发现胰岛素样生长因子
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骨骼肌损伤在运动医学领域十分常见,是较难处理的运动损伤.骨骼肌损伤后再生能力有限,自然愈合质量不可靠,易发生再次损伤,严重影响了肌肉运动功能.研究发现胰岛素样生长因子1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)能有效促进成肌细胞的增殖及分化形成肌管,同时增强再生肌肉的收缩力.但局部直接注射IGF-1效应往往短暂,效果并不理想.随着基因治疗技术的发展,使得骨骼肌损伤的生长因子基因治疗成为可能.可将生长因子基因导入成肌细胞,然后植入骨骼肌损伤区,通过该基因在体内的持续表达,诱导体内成肌细胞分化为肌细胞并融合为肌管,进而促进肌肉愈合.该实验第一部分构建了携人胰岛素样生长因子1(human Insulin-like growthfactor-1,hIGF-1)基因的真核表达质粒并体外转染成肌细胞.将hIGF-1基因与pcDNA3.1质粒重组为真核表达质粒pcDNA3.1-hIGF-1,经酶切及测序鉴定hIGF-1基因片段插入方向正确;采用脂质体介导法将重组质粒转染成肌细胞株C2C12细胞,经G418筛选培养4周,获得阳性细胞克隆,并转染了绿色荧光蛋白pEGFP-N3质粒检测转染效率.该实验第二部分对转染重组质粒的C2C12细胞进行了hIGF-1表达的鉴定并检测表达产物的生物活性.分别从mRNA水平和蛋白水平用RT-PCR方法和免疫细胞化学方法证实hIGF-1在C2C12细胞中获得了稳定表达;采用MTT法检测转染后细胞的培养上清对BALB/c 3T3细胞的促增殖作用,证实细胞表达产物hIGF-1具有良好的生物活性;流式细胞仪检测转基因细胞的细胞周期变化证实细胞增殖速度明显加快.
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