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目的:从山核桃叶总黄酮苷元及其五个单体化合物小豆蔻明、汉黄芩素、白杨素、球松素查尔酮、松属素中,筛选出能够抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移的最有效单体,研究该单体对大鼠血管平滑肌细胞的抑制作用及其机制,为心血管疾病新药的研发提供实验依据。方法:(1)组织贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs),研究山核桃叶黄酮苷元对rVSMCs增殖和迁移的抑制作用。用细胞计数法检测细胞增殖,伤口愈合实验检测细胞迁移。(2)用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导rVSMCs增殖和迁移。用10、100、1000 nMAngⅡ作用24 h;在此基础上用AngⅡ作用12、24、48 h,分别检测rVSMCs增殖和迁移。在此基础上检测山核桃叶黄酮苷元对Ang Ⅱ诱导的rVSMCs增殖和迁移的抑制作用,筛选出能够抑制AngⅡ诱导的rVSMCs增殖和迁移的最有效单体。用细胞计数法检测细胞增殖,伤口愈合实验检测细胞迁移。(3)采用Western-blot技术检测有效单体对AngⅡ诱导的rVSMCs p-Akt、Akt、p-p38MAPK、p38MAPK、p-ERK、ERK表达量的影响,探索其可能的作用机制,并分别用 Akt、p38MAPK、ERK 的选择性抑制剂 MK-2206、SB203580、PD98059 进行验证。结果:(1)有效抑制rVSMCs增殖的是总黄酮苷元和小豆蔻明,其IC50分别为38.7 μg/mL和23.4 μg/mL;有效抑制rVSMCs迁移的是总黄酮苷元、小豆蔻明、汉黄芩素和白杨素,其 IC50 分别为 17.60 μg/mL、17.18 μg/mL、23.20μg/mL 和 22.39 μg/mL。(2)100 nM AngⅡ 作用 12 h,可显著促进 rVSMCs 增殖和迁移(P<0.01)。12.5μg/mL总黄酮苷元和10 μg/mL小豆蔻明作用12 h可剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的rVSMCs增殖(P<0.01),50μg/mL汉黄芩素、白杨素和球松素查尔酮作用12h对AngⅡ诱导的rVSMCs增殖有微弱抑制(P<0.05)。12.5 μg/mL总黄酮苷元,10 μg/mL小豆蔻明、汉黄芩素、白杨素、球松素查尔酮和松属素作用12 h均能剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的rVSMCs 迁移(P<0.01)。(3)100 nM AngⅡ作用12h,可显著诱学rVSMCsp-Akt、p-p38MAPK、p-ERK的表达(P<0.01),而Akt、p38MAPK、ERK的表达量无明显变化。37μM小豆蔻明作用12 h可显著抑制 AngⅡ诱导的 rVSMCs p-Akt、p-p38MAPK、p-ERK 的表达(P<0.01)并呈剂量依赖性,Akt、p38MAPK、ERK的表达无明显变化。100 nM MK-2206、10 μM SB203580、30 μM PD98059作用12 h均能显著抑制AngⅡ诱导的rVSMCs增殖和迁移(P<0.01)。结论:山核桃叶黄酮苷元中,有效抑制rVSMCs增殖的是总黄酮苷元和小豆蔻明,有效抑制rVSMCs迁移的是总黄酮苷元、小豆蔻明、汉黄芩素和白杨素,同时抑制rVSMCs增殖和迁移最有效的是小豆蔻明。同时,总黄酮苷元和小豆蔻明能够有效抑制AngⅡ诱导的rVSMCs增殖,而总黄酮苷元和五个单体均能有效抑制AngⅡ诱导的rVSMCs迁移,能够同时抑制AngⅡ诱导的rVSMCs增殖和迁移最有效的是小豆蔻明。小豆蔻明对Ang Ⅱ诱导的rVSMCs增殖和迁移的抑制可能通过抑制p38MAPK、Akt、ERK磷酸化来实现。