新生期结直肠刺激对幼鼠内脏痛敏感性的影响及脊髓c-fos蛋白的表达

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新生期结直肠刺激对幼鼠内脏痛敏感性影响及脊髓c-fos蛋白表达目的:采用行为学和电生理评价方法,探讨新生期伤害性结直肠扩张刺激(CI)对幼鼠内脏痛觉敏感性影响,并建立幼鼠内脏痛觉高敏感模型。通过观察内脏高敏感幼鼠腰骶段脊髓背角c-fos蛋白表达,探讨幼鼠出现内脏痛觉高敏的作用机制。方法:[1]32只SD乳鼠随机分成实验组和对照组,每组16只;实验组乳鼠出生第8天开始给予CI,每日1次,连续7d,对照组不给予CI,常规饲养到幼鼠期(6周龄)进行下列研究:①结直肠扩张(CRD)刺激下腹壁撤退反射(AWR)和痛阈测定评估肠道痛觉敏感性:②降结肠病理学检查;③CRD刺激下腹外斜肌放电法评估肠道痛觉敏感性。[2]32只SD乳鼠按析因设计分成4组,每组8只,A组为模型组并在6周龄时接受CRD,B组为模型组,6周龄未给予CRD,C组为对照组,6周龄接受CRD,D组为对照组,6周龄未给予CRD。A、C组幼鼠CRD接受刺激后2小时和B、D组幼鼠留取L6至S2脊髓,应用免疫组织化学染色及计算机图像分析系统进行脊髓Fos阳性(FLI)细胞数和灰度积分值半定量分析。采用SPSS11.0软件包进行统计分析,α=0.05为显著性检验标准。结果:[1]随CRD增加,幼鼠AWR评分增加:AWR评分受新生期接受CI(造模)及性别影响(F值为45.19、7.44,p<0.05),AWR评分雌性明显高于雄性,实验组明显高于对照组,性别与造模有明显交互作用(F=4.66,p=0.040);实验组与对照组AWR评分在CRD20、40mmHg时差异明显,CRD60、80mmHg时差异不明显。实验组和对照组幼鼠痛阈值为26.5±4.9mmHg、47.8±5.0mmHg(F=149.753,p<0.01)。[2]随CRD增加,幼鼠腹外斜肌放电波幅增加;腹外斜肌放电波幅受造模及性别影响(F值为7.09、5.95,p<0.05);腹外斜肌放电波幅雌性明显高于雄性,实验组明显高于对照组,实验组与对照组腹外斜肌放电幅值在CRD30、45mmHg时有明显差异,CRD 60mmHg、75mmHg时差异不明显。两组幼鼠体重无差异,降结肠未见明显病理组织损伤。[3]新生期CI和幼鼠6周龄时CRD均可使幼鼠腰骶段脊髓背角FLI细胞数显著升高,FLI灰度积分值显著降低,差别均有统计学意义;CI和CRD对脊髓背角FLI灰度积分值的影响有交互作用。结论:新生期持续CI可造成幼鼠痛阈下降,出现慢性内脏高敏感性,且没有明确的组织病理学改变,为幼鼠内脏高敏性模型。与行为学评价相比,电生理评价方法为定量检测,能较为客观反映动物内脏痛觉的致敏效应,特别适用于幼年动物模型。新生期持续CI可导致幼鼠脊髓初级中枢敏化,接受伤害性CRD刺激后能显著引起脊髓神经元Fos蛋白高表达,出现慢性内脏痛觉高敏感性。
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