咪唑乙烟酸是我国杂草控制的重要农药之一,它是一种典型的长残效除草剂。这种除草剂的缺点是它在土壤中会残留很长一段时间,通常达2～3年,长的可达4年以上,难以降解。无论在轮作或是连作中使用咪唑乙烟酸,都很容易造成后茬作物的药害,减少产量甚至绝产。木霉菌(Trichooerma)是目前最有效的生物防治真菌,近年它的防治效果和稳定性得到了显著提高,并且还对生物农药有防治效果。所以,筛选出具有抗化学农药的木霉菌,并对其降解农药的基因重组蛋白做降解效能评价,对于提高生物控制水平和减少环境污染是非常重要的。本试验利用实验室中已经筛选出的大豆田环境下高效降解咪唑乙烟酸残留的短密木霉菌种(T.brevicompactum),通过转录组测序,Unigene进行七大功能数据库注释(NR、NT、GO、KOG、KEGG、SwissPprot 和 InterPro),共有 7 个差异基因,分析出对降解咪唑乙烟酸有作用的目的基因,并成功克隆得到Triy1基因,编码256个氨基酸,是疏水蛋白。通过BlastP预测其具有Hydrolase superfamily的保守区结构域。荧光定量RT-qPCR方法分析,TriHHy1基因呈下调表达。且成功构建了基因TriHHy1的真核重组表达载体pPIC9K-TriHy1并转化到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中获得毕赤酵母重组菌株GS115-TriHy1,并利用甲醇成功诱导表达了分泌型毕赤酵母重组蛋白G-rTriHy1,经Tricine-SDS-PAGE电泳检测,在29.65 KDa处可见分泌蛋白,与理论值基本一致,证明TriHy1蛋白在毕赤酵母中能大量表达。对重组蛋白G-rTriHy1对咪唑乙烟酸降解效能进行了液相分析,降解率高达51.22%,证明重组蛋白G-rTriHy1对咪唑乙烟酸有很大的降解作用。通过对TriHHy1基因的克隆、生物信息学分析及重组蛋白的构建为其对咪唑乙烟酸降解作用的研究提供基础数据和理论依据,这样的做法应用到实际,对维持生态平衡和提高大豆田经济价值非常重要。