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目的:探索以胎盘血为来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(即CIK细胞)有效的原代培养方法,及其对肿瘤细胞的杀伤作用,为该细胞在肿瘤过继免疫的临床治疗提供一定的参考。 方法:在无菌条件下,采集健康足月产胎儿的胎盘脐静脉血及健康成人的外周血,以Ficoll离心法分别提取单个核细胞,通过定时定量加入INF-γ、IL-2、IL-1、抗CD3单克隆抗体等细胞因子,使胎盘血来源单个核细胞及外周血单个核细胞诱导培养成为CIK细胞。通过流式细胞仪测定细胞的免疫表型,利用CCK试剂在细胞增殖的最高峰时期检测不同浓度的效应细胞对人肺腺癌细胞株A549,宫颈癌细胞株Hela以及肝癌细胞株HepG2的杀伤作用,以及不同作用时间对肿瘤细胞杀伤率的变化。 结果:1.两种单个核细胞通过一定量的细胞因子相互联合作用,均可培养出活性高数量大的CIK细胞,胎盘血来源的CIK细胞在培养的第6天左右开始呈对数增殖,在第15天左右达高峰,增殖的倍数是第0天的(207.91±20.08)倍,与外周血来源CIK细胞有一定的差异(P<0.05),15天之后两组CIK细胞均进入增殖的平台期;2.收集增殖高峰期的两种CIK细胞,检测CD3+CD8+和CD3+CD56+的细胞较第0天均有明显的增长,胎盘血来源的CIK细胞组两种表型的细胞分别增长了3倍和1000倍,与外周血来源的CIK细胞组相比较,在统计学上具有差异;3.在效应细胞对肿瘤细胞的杀伤性检测中我们发现:针对A549、Hela及HepG2这三种肿瘤细胞,两种来源的CIK细胞均表现出了一定细胞毒性,并且CIK细胞的浓度越高其对肿瘤细胞的杀伤率就越高,在效靶比为40︰1组胎盘血来源的CIK细胞对A549的杀伤作用最强(76.59±2.38),与外周血来源的CIK细胞存在差异(p<0.05),对Hela细胞和HepG2细胞的杀伤率分别为(75.54±6.92)和(72.49±3.16),但跟外周血来源组相比存在明显差异(p<0.01);4.分别比较在相互作用为24,48,72小时的情况下检测胎盘血来源CIK细胞的杀瘤活性,我们发现在相互作用时间在48小时时,效应细胞对A549,Hela,HepG2三组肿瘤细胞的杀伤率分别达到了(76.35±2.04),(75.96±4.56),(73.92±2.39),与24小时组存在差异(p<0.05),但我们同时发现相比较作用48小时与72小时的杀伤率,二者的杀伤力相差甚微,p>0.05,两组之间无统计学意义,说明CIK细胞在48小左右达到了最大杀伤作用。 结论:1.胎盘血可作为诱导CIK细胞的重要来源;2.利用各细胞因子可成功诱导出大量的CIK细胞,其增殖高峰位于培养的第15天左右,适宜在此期进行临床输注;3.在本实验研究的浓度范围内,胎盘血来源的CIK细胞杀瘤活性高于外周血来源的CIK细胞;4.胎盘血来源的CIK细胞对本实验中的三组肿瘤细胞株的杀伤性与时间相关。