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[目的]胞壁酰二肽（Muramyl Dipeptide,MDP）是一种由N-乙酰胞壁酸与L-丙氨酸-D-异谷酰胺的短氨基酸链连接而成的具有免疫刺激功能的短肽。人们对MDP及其衍生物的结构修饰进行了广泛的研究,以期有效地提高其佐剂活性,增强疫苗的免疫应答。本实验探讨MDP用作佐剂在新冠亚单位重组蛋白疫苗的效应,以期在体内提高新冠疫苗的免疫反应。[方法]所用动物品系为Bal B/C小鼠,雌性,6至8周龄,然后将30只小鼠随机分成6只每组,共5组,分别是50μg疫苗组,“20μg MDP+10μg疫苗”组,“20μg MDP+50μg疫苗”组,“100μg MDP+10μg疫苗”组,“100μg MDP+50μg疫苗”组。亚单位疫苗S蛋白与MDP进行肌肉注射联合免疫。各组分别在第0、第3周时,进行免疫,免疫次数均为2次。在第2次免疫完成后的2周,眼球取血,分离血清,待用于体液免疫的检测。体液免疫应答通过对小鼠血清进行100、1000、10000倍稀释后,用ELISA技术检测其特异性IgG抗体。[结果]ELISA结果显示:①将小鼠血清稀释100倍后,“与50μg疫苗组相比,20μg MDP+50μg疫苗组在使用等量疫苗剂量时加入20μg MDP情况下,在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应（P<0.05）”。“与50μg疫苗组相比,100μg MDP+10μg疫苗组在减少疫苗剂量时加入100μg MDP情况下,在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应（P<0.05）”。“与50μg疫苗组相比,100μg MDP+50μg疫苗组在使用等量疫苗剂量时加入100μg MDP情况下,在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应（P<0.05）”。“与50μg疫苗组相比,20μg MDP+10μg疫苗组在减少疫苗剂量时加入20μg MDP情况下,未在小鼠体内诱导显著增强的IgG抗体反应（P>0.05）”。②将小鼠血清稀释1000倍后,“与50μg疫苗组相比,100μg MDP+50μg疫苗组在使用等量疫苗剂量时加入100μg MDP情况下,在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应（P<0.05）”,“与50μg疫苗组相比,其余三组小鼠未在体内诱导显著增强的IgG抗体反应（P>0.05）”。③将小鼠血清稀释10000倍后,“与50μg疫苗组相比,四组小鼠未在体内诱导显著增强的IgG抗体反应（P>0.05）”。[结论]MDP作为佐剂可有效增强新冠蛋白疫苗在小鼠体内的体液免疫反应。【目的】在体外和体内,表面负电的生物分子（基因）和药物可以被层状双金属氢氧化物（LDH）有效递送。通过将金刚院胺（Adamantanamine,Ada）修饰至NiZnAl表面,研究Ada修饰的层状双金属氢氧化物NiZnAl作为佐剂在HIV DNA疫苗中的应用前景。【方法】24只6至8周龄的BalB/C雌性小鼠,小鼠每组6只,并随机分成4个组,四组分别是,空白对照组,HIV DNA疫苗组,Ada+HIV DNA疫苗组,NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组。HIV Gag DNA疫苗和HIV gpl40 DNA疫苗通过质粒提取获得,与NiZnAl-Ada、Ada进行联合免疫。各组小鼠进行3次免疫,免疫间隔的时间为,第0、2、4周,第三次为最后一次免疫,然后再进行2周的饲养,眼球采血、取脾脏,进行体液免疫,和细胞免疫的检测。体液免疫应答通过对小鼠血清进行500、1000、5000倍稀释后,用ELISA技术检测其Gag特异性和gpl40特异性IgG抗体;在单细胞水平上,通过使用ELISPOT检测IFN-y细胞因子分泌情况;流式细胞仪检测CD4+T和CD8+T细胞中CD107a、IFN-y、TNF-a、IL-2、IL-4的分泌,B细胞表面分子CD40、CD69和树突状细胞表面分子CD80、CD86的分泌情况。【结果】ELISA实验结果:①当小鼠血清稀释500倍、1000倍、5000倍后,“与空白对照组相比,HIVDNA疫苗组小鼠显示,其体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为Gag特异性（P<0.05）”。“与空白对照组相比,Ada+HIV DNA疫苗组小鼠显示,其体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为Gag特异性（PC0.05）”。“与空白对照组相比,NiZnAl-Ada+HIVDNA疫苗组小鼠显示,其体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为Gag特异性（P<0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,Ada+HIV DNA疫苗组小鼠显示,其未在小鼠体内诱导显著增强的IgG抗体反应,该反应为Gag特异性（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组小鼠显示,其未在小鼠体内诱导显著增强的IgG抗体反应,该反应为Gag特异性（P>0.05）”。②当小鼠血清稀释500倍、1000倍、5000倍后,“与空白对照组相比,HIV DNA疫苗组小鼠显示,其在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为gpl40特异性（P<0.05）”。“与空白对照组相比,Ada+HIVDNA疫苗组小鼠显示,其在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为gpl40特异性（P<0.05）”。“与空白对照组相比,NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组小鼠显示,其在小鼠体内诱导了显著增强的IgG抗体反应,该反应为gpl40特异性（P<0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,Ada+HIVDNA疫苗组小鼠显示,其未在小鼠体内诱导显著增强的IgG抗体反应,该反应为gpl40特异性（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组小鼠显示,其未在小鼠体内诱导显著增强的IgG抗体反应,该反应为gpl40特异性（P>0.05）”。ELISPOT实验结果:①“与空白对照组相比,HIVDNA疫苗组在小鼠体内诱导了显著增强的IFN-y的表达（P<0.05）”。“与空白对照组相比,Ada+HIV DNA疫苗组在小鼠体内诱导了显著增强的IFN-y的表达（P<0.05）”。与空白对照组相比,NiZnAl-Ada+fflVDNA疫苗组在小鼠体内诱导了显著增强的IFN-y的表达（PC0.05）”。②“与HIVDNA疫苗组相比,Ada+HIVDNA疫苗组未在小鼠体内诱导显著增强的IFN-y的表达（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组未在小鼠体内诱导显著增强的IFN-y的表达（P>0.05）”。流式细胞术实验结果:①“与空白对照组相比,在HIV DNA疫苗组、Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,CD4+T细胞中CD107a、IFN-y、TNF-a、IL-2、IL-4的分泌均无明显统计学意义（P>0.05）”。“与HIV DNA疫苗组相比,在Ada+fflV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,CD4+T细胞中CD107a、IFN-y、TNF-a、IL-2、IL-4的分泌均无明显统计学意义（P>0.05）”。②“与空白对照组相比,在HIV DNA疫苗组、Ada+fflV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+fflV DNA疫苗组中,CD8+T细胞中CD107a、IFN-y、TNF-a、IL-2、IL-4的分泌均无明显统计学意义（P>0.05）”。“与HIV DNA疫苗组相比,在Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,CD8+T细胞中CD107a、IFN-y、TNF-a、IL-2、IL-4的分泌均无明显统计学意义（P>0.05）”。③“与空白对照组相比,在NiZnAl-Ada+HIVDNA疫苗组中,树突状细胞CD80的分泌有明显统计学意义（P<0.05）”。“与空白对照组相比,在HIV DNA疫苗组、Ada+HIV DNA疫苗组中,树突状细胞CD80的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,在Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,树突状细胞CD80的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。④“与空白对照组相比,在HIVDNA疫苗组、Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,树突状细胞CD86的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,在Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,树突状细胞CD86的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。⑤“与空白对照组相比,在HIVDNA疫苗组、Ada+HIV DNA疫苗组和NiZnAl-Ada+HIV DNA疫苗组中,B细胞CD40、CD69,其细胞因子的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。“与HIVDNA疫苗组相比,在Ada+HIVDNA疫苗组和NiZnAl-Ada+ffiVDNA疫苗组中,B细胞CD40、CD69,其细胞因子的分泌无明显统计学意义（P>0.05）”。【结论】1.层状双金属氢氧化物NiZnAl-Ada作为佐剂对HIV DNA疫苗诱发的体液免疫反应差异无统计学意义。2.层状双金属氢氧化物NiZnAl-Ada作为佐剂对HIV DNA疫苗诱发的IFN-y细胞免疫反应差异无统计学意义。3.层状双金属氢氧化物NiZnAl-Ada作为佐剂对HIV DNA疫苗诱发的T细胞免疫反应差异无统计学意义。