LncRNA-MEG3在心肌纤维化及心肌成纤维细胞活化增殖中的表达变化研究

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目的心肌纤维化是大多数心脏疾病晚期的病理表现,心肌成纤维细胞(CFs)的增殖活性增强是心肌纤维化的主要诱因,表现为心肌组织中胶原分子等细胞外基质(ECM)生成的增多。已证明LncRNA-MEG3在肿瘤中具有抑制肿瘤细胞的生长迁移作用,同时据文献报道MEG3也参与了器官组织纤维化的调控,所以本研究通过建立的大鼠心肌组织纤维化模型跟细胞水平纤维化模型来研究MEG3在大鼠心肌纤维化及CFs活化增殖过程中的表达变化,以此来探究MEG3在心肌纤维中可能存在的作用及意义。方法取相同条件的SD雄性大鼠30只平均分成两组,一组每天用异丙肾上腺素(ISO)5 mg/kg腹部皮下注射构造心肌纤维化动物模型;剩下一组给予相同条件下每天注射10 ml/kg的生理氯化钠溶液为正常对照组,连续注射两周后用脊椎脱臼法将两组大鼠致死并解剖取出心脏标本。制作心脏组织切片后行HE、Masson染色,并用显微镜观察大鼠心肌组织的病理变化然后计算出切片中心肌组织的胶原分数。提取心肌纤维化动物模型中大鼠心肌组织的总蛋白跟总RNA,然后用Western blotting、q RT-PCR法分别检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原分子(Collagen I)在蛋白和mRNA水平上的表达情况,以及MEG3在两组大鼠心肌组织中的表达变化。提取乳鼠CFs后分成两组培养,一组采用转化生长因子-β1(TGF-β1)作用48 h后构建心肌纤维化细胞模型组;另一组不给予TGF-β1作用在相同条件下培养生长为空白对照组。培养48 h后提取两组CFs的总蛋白和总RNA,然后同样用Western blotting、q RT-PCR法分别检测α-SMA、Collagen I在蛋白和mRNA水平的相对表达量,以及MEG3在两组CFs中的表达变化。同时用CCK-8法再分别检测两组CFs细胞培养48小时后的细胞活性变化。结果在ISO诱导的心肌纤维化动物模型中,HE、Masson染色提示较正常对照组ISO模型组的心肌细胞体积变大、形态不规则,细胞间质变多、胶原明显增加,胶原分数也有所增加;Western blotting结果提示α-SMA、Collagen I蛋白分子表达较正常对照组显著增多;q RT-PCR结果提示较正常对照组α-SMA、Collagen I mRNA表达明显增多,而MEG3基因表达减少。在用TGF-β1刺激诱导CFs细胞活化增殖的纤维化细胞模型中,CCK-8实验结果提示使用TGF-β1刺激CFs 24h、48h后较空白对照组CFs的OD值都明显增加,说明细胞增殖活性明显增强;Western blotting结果提示TGF-β1刺激诱导CFs的细胞模型组中α-SMA、Collagen I蛋白分子表达较未给予TGF-β1诱导刺激的空白对照组显著增多,q RT-PCR结果也同样提示较未给予TGF-β1诱导刺激的空白对照组α-SMA、Collagen I mRNA表达明显增多,而MEG3基因表达是明显减少的。结论LncRNA-MEG3在大鼠心肌纤维化组织及CFs细胞活化增殖中的表达显著降低,提示LncRNA-MEG3可能在大鼠心肌纤维化及心肌成纤维细胞活化增殖过程中发挥了负调控作用,为临床心肌纤维化防治研究提供新的思路。
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