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目的:采用人肝癌细胞HepG2、小鼠成肌细胞C2C12及小鼠成纤维细胞3T3-L1研究芒果苷体外活性,并从基因、蛋白的表达以及炎症因子分泌水平探讨MGF改善胰岛素抵抗发生可能的作用机制,为进一步研究MGF改善2型糖尿病发生奠定理论基础。方法:采用浓度为]0-6 mol/L的胰岛素刺激HepG2细胞、浓度为0.5 mM的棕榈酸刺激C2C12细胞、浓度为1 μmol/L的棕榈酸刺激3T3-L1细胞建立体外胰岛素抵抗模型;CCK-8法检测MGF对三种细胞活性的影响以便筛选合适的药物浓度;GOD-POD法测定MGF对三种细胞葡萄糖消耗量的影响;利用RT-PCR法检测HepG2细胞、C2C12细胞PI3K/AKT信号通路中InsR、IRS1、PI3K(p85)等位点mRNA和炎症通路中IKKα、IKKβ mRNA的表达;Western Blot法检测HepG2细胞、C2C12细胞PI3K/AKT信号通路和炎症通路中β-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα、IKKα等相关蛋白的表达;酶联免疫分析法检测MGF对3T3-L1细胞中的TNF-α、IL-6、IL-1βF分泌水平的影响。结果:1.MGF对HepG2胰岛素抵抗细胞的作用:1)CCK-8法测定:MGF浓度在大于125 μg/mL后对细胞生长有抑制作用。2)GOD-POD法测定葡萄糖消耗量:高、中剂量组的MGF可不同程度的增加HepG2细胞的葡萄糖消耗量(P<0.01),低剂量组虽有增加但无统计学意义。3)RT-PCR 检测:MGF 高剂量组能上调 IRS1、InsR、PDK1、AKT、AMPK、GLUT2、GLTUT4 mRNA表达,下调PCK1 mRNA表达(P<0.01或P<0.05);低剂量组能上调GLUT2 mRNA表达(P<0.05),其他基因较模型组差异但无统计学意义。4)Western Blot 法:MGF 高剂量组能上调 p-IRS1(Thr895)、P-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、InsR等蛋白表达,并下调PCK1、IKKα及IKKβ蛋白表达水平,较模型组差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05);低剂量组可上调GLUT2蛋白表达,且下调PCK1蛋白表达水平(P<0.05)。2.MGF对C2C12胰岛素抵抗细胞的作用:1)CCK-8法测定:MGF浓度在大于62.5 μg/mL后对C2C12细胞生长有抑制作用。2)GOD-POD法测定葡萄糖消耗量:高剂量的MGF可增加C2C12细胞的葡萄糖消耗量(P<0.05),中、低剂量消耗量虽有增加但无统计学意义。3)RT-PCR 检测:MGF 高剂量组可上调 IRS1、PI3K、PDK1、AKT、PDE3B、FoxO1等mRNA表达,并下调IKKα、IKKβ mRNA表达(P<0.01或P<0.05);低剂量组可上调IRS1、PI3K、AKT、AMPK、GLUT4mRNA表达,较模型组差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。4)Western Blot 法:MGF 高剂量组可上调 p-PDK1(S241)、p-AKT(Thr308)、p-AMPK(Thr172)、p-GSK-3β(Ser9)、PI3K(p85)及InsR蛋白表达量,下调IKKα、IKKβ蛋白表达(P<0.01或P<0.05);低剂量组可上调InsR蛋白表达(P<0.05);m-TOR蛋白正常组、模型组、实验组表达差异均无统计学意义。3.MGF对3T3-L1胰岛素抵抗细胞的作用:1)CCK-8法测定:MGF浓度在大于62.5 μg/mL后对3T3-L1细胞生长有抑制作用。:2)GOD-POD法测定葡萄糖消耗量:高、中剂量组的MGF可不同程度的增加3T3-L1细胞的葡萄糖消耗量(P<0.01),低剂量组虽有增加但无统计学意义。3)酶联免疫分析法:MGF高、中剂量组可降低炎症因子TNF-α IL-6及IL-1β分泌水平,较模型组差异均有统计学意义(P<0.01);低剂量组可降低TNF-α分泌水平(P<0.05),IL-6、IL-1β虽有降低但无统计学意义。结论:1.在HepG2胰岛素抵抗细胞模型中,MGF能提高细胞糖消耗水平,上调胰岛素PI3K/AKT信号通路中的关键基因如IRS1、InsR、AKT、GLUT2、AMPK等的表达,并上调InsR、GLUT2、AMPKα及磷酸化IRS1、AKT、GSK-3β等蛋白的表达水平,通过影响胰岛素依赖(AKT途径)来改善胰岛素抵抗。2.在C2C12胰岛素抵抗细胞模型中,MGF可上调胰岛素PI3K/AKT信号通路中的关键基因如PI3K、AKT、GSK-3β、AMPK等的表达,并上调InsR、PI3K、磷酸化AKT、磷酸化GSK-3β、磷酸化AMPKα等蛋白的表达发挥改善胰岛素抵抗的作用,增加细胞的糖消耗水平。3.在3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型中,MGF能提高细胞糖消耗水平,通过抑制炎症因子的分泌量发挥改善胰岛素抵抗的作用。