10.羟基-2-癸烯酸(10-hydroxy-2-decenoic acid,10-HDA)是一种不饱和中链脂肪酸,是蜂王浆的主要活性成分,目前自然界中主要在蜂王浆中发现,因此又称王浆酸。10-HDA不仅是蜂王浆的主要质量指标,而且研究表明10-HDA具有抗菌、免疫调节及抗肿瘤等多种重要的生理功能,因此,10-HDA具有重要的医药和保健价值,应用前景广泛。对10-HDA的生物合成途径的探索对于了解其生物合成的本质和对其实现工业化生产有着重要的意义。本研究通过克隆10-HDA生物合成相关基因蜜蜂电子转移黄素蛋白β基因和3.酮脂酰辅酶A硫解酶基因,构建真核表达载体,整合到毕赤酵母基因组进行表达,为进一步探索10-HDA生物合成途径奠定基础。硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids, MCFAs)的积累起着关键作用。我们通过克隆拟南芥ACP硫酯酶基因,构建真核表达载体,分析外源基因的插入对毕赤酵母代谢产脂肪酸的影响,探索构建微生物工程菌代谢产10-HDA的可行性。以拟南芥cDNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因AtFatA,经EcoR Ⅰ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒pPICZαA-AtFatA。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,成功构建AtFatA的真核表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母AtFatA重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(写全称),辛酸产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。