本研究以已成功构建的pVAX-LAT重组载体为模板,根据GenBank中LATORFs的核苷酸序列设计引物,并在引物的5端分别引入Kpn I及Pst I酶切位点,特异性扩增LAT ORFs序列。TA克隆后转化大肠杆菌Top 10,抗性筛选阳性转化子,双酶切、测序鉴定重组质粒,BLAST比对分析目的序列核苷酸的保守性及其编码蛋白的相关变化。测序结果比对发现ORF1及ORF3序列在HSV-2相同病毒株内和不同病毒株间均存在一定突变,而ORF2则比较保守。因此,我们进一步PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经Kpn I、Pst I双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,以RT-PCR及Western blotting检测其在Vero细胞中的表达。 本研究成功构建了ORF2-pcDNA 6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。这为有效研究LAT介导的单纯疱疹病毒潜伏及激活感染提供了研究工具,奠定了一定基础。