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背景与目的多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统性炎性疾病,神经系统轴突髓磷脂鞘破坏。患者早期可出现肌肉和关节隐痛,疲劳无力,僵硬等症状。随着病情的加重,患者可出现感觉障碍、视力损伤和尿失禁等。MS是最常见的中枢神经系统慢性炎症疾病,主要患病人群是男性青壮年。多种非特异性免疫抑制剂虽可控制早期MS疾病进展,但对严重的患者治疗效果较差,且有很大的毒副作用。因此,寻求MS新的疗法是很多研究者努力的方向。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是研究MS的动物模型,是用人中枢神经系统抗原成分髓磷脂免疫动物发展成的一种自身免疫性脱髓鞘疾病。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG),髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)和蛋白脂质蛋白(proteolipid protein,PLP)均可诱导小鼠产生EAE。髓磷脂特异性Th1和Th17炎性细胞迁移至CNS,诱导中枢神经系统慢性炎症,引起髓鞘脱失,是EAE的主要致病细胞。MOG肽免疫可诱导小鼠产生EAE,然而EAE诱导的第6天腹腔再次注射MOG肽可预防EAE发病。Treg是维持自身免疫耐受的重要细胞。MOG肽诱导的EAE免疫耐受是否与MOG肽诱导产生Treg有关尚待进一步研究。这是本课题拟解决的关键问题。方法(1)MOG肽免疫C57小鼠,MOG35-55肽;弗氏佐剂,结核杆菌,磷酸盐缓冲液(PBS)乳化后,小鼠背部皮下注射(200u L/只),每组8只,分为3组,EAE组(MOG诱导组)、MOG治疗组、OVA组(分别在免疫第6-15天腹腔注射MOG、OVA肽,50 mg每只每天)。(2)临床评分、脊髓组织冰冻切片HE染色,评价MOG肽的治疗效果。(3)取脑和脊髓组织,研磨制备组织匀浆,percoll梯度密度法分离组织中浸润的单个核细胞,PMA、Ionomycin培养细胞6 h,流式分析中枢神经系统Th1和Th17细胞的表达。(4)取小鼠脾脏,制成单个核细胞混合悬液,流式分析CD4+CD25+FOXP3+(Treg)调节细胞的表达。(5)磁珠分选CD4+CD25+T细胞,检测细胞纯度,然后将分选细胞加入到MOG-T细胞增殖体系中,细胞培养3天后加H3-Td R,继续培养16 h后γ闪烁计数仪检测cpm值。结果(1)MOG肽治疗组小鼠临床评分明显减轻,OVA肽无治疗效果(临床评分:EAE组,3.7±0.3;MOG组,0;P<0.01)。(2)EAE组小鼠脊髓中有很多炎性细胞浸润,MOG治疗后,组织切片脊髓炎性细胞明显浸润减少。(3)未治疗组(EAE)CNS中IFN-γ为52.1%,IL-17细胞为2.01%;MOG治疗组CNS中IFN-γ为3.57%,IL-17为0.557%,MOG治疗使CNS炎性细胞浸润明显减少。(4)MOG治疗组与未治疗组(EAE)脾脏内调节细胞的比例无明显变化。初始小鼠7.19%,EAE组5.77%,MOG治疗组4.73%。(5)磁珠分选出的未治疗组和MOG治疗组小鼠脾脏Treg细胞,对MOG-T细胞的增殖具有相同的抑制功能。H3-Td R掺入法检测Treg细胞的功能无明显的变化。结论MOG可预防和治疗EAE。Treg细胞在疾病的发展和治疗过程中细胞比例无明显的变化,对MOG-T细胞具有相同的抑制功能。所以对疾病的治疗不起关键作用。