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第一部分帕金森病患者外周血浆中CIP2A浓度降低
目的：比较帕金森病(PD)患者与健康对照者外周血浆CIP2A浓度水平。
方法：抽取临床诊断为原发性PD患者与健康对照者的外周血，离心获得血浆。收集PD患者与健康对照者的基本信息，包括姓名、年龄、性别、病程，PD患者还需收集量表信息包括统一帕金森氏症评定量表第三部分(UPDRS-III)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估表(MoCA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)。通过定量ELISA法测定临床确诊的原发性PD患者以及年龄和性别匹配的健康对照者的血浆CIP2A浓度。采用曼惠特尼U检验对PD组与对照组血浆CIP2A浓度行统计学分析，做出相应受试者工作特征(ROC)曲线，计算曲线下面积，获得该指标的检测特异度与灵敏度。相关性分析评估CIP2A与临床运动及非运动症状之间是否存在相关性。
结果：PD患者组的血浆CIP2A浓度显著低于年龄和性别相匹配的对照组，分别为1.721(1.435-2.428)ng/ml和3.051(2.36-5.475)ng/ml；P<0.0001。ROC曲线中，能够将PD患者与年龄和性别匹配的正常对照者区分开来的血浆CIP2A曲线下面积为0.776，表明可将CIP2A血浆浓度作为诊断PD的指标，其截断值2.528ng/ml，灵敏度80.65%，特异度69.84%。将血浆CIP2A浓度与UPDRS-III、MMSE、MoCA、HAMD、HAMA的量表评分进行相关性分析，结果显示，PD患者血浆CIP2A浓度与各量表评分无明显相关。
结论：与健康对照者相比，PD患者血浆CIP2A浓度明显较低，或可作为PD患者潜在的诊断标志物。PD患者外周血血浆中CIP2A浓度与其认知水平、运动功能损害程度、抑郁和焦虑程度均无相关性，故PD患者血浆CIP2A浓度不适用于监测疾病进展。
第二部分帕金森病细胞模型中CIP2A分子表达增加
目的：观察PD细胞模型中CIP2A分子表达情况及对应的病理改变。
方法：在SH-SY5Y细胞系经CCK8摸索鱼藤酮造模的适宜浓度。建立PD鱼藤酮细胞模型并验证模型是否成功，细胞免疫荧光及WesternBlot比较CIP2A表达在造模前后的改变，以及鱼藤酮模型下α-syn、磷酸化α-syn、PP2A表达变化。结果：经鱼藤酮处理后，在细胞水平出现PD样改变，如α-syn、磷酸化α-syn表达增加，这些均表明PD鱼藤酮细胞模型的成功建立。检测CIP2A水平，发现鱼藤酮处理后CIP2A表达水平升高，PP2A表达降低。
结论：CIP2A蛋白水平在鱼藤酮造模后表达升高，其下游PP2A蛋白表达降低，这一改变可能是导致α-syn、磷酸化α-syn表达增加的原因。CIP2A是否通过降低PP2A活性引起PD的病理性改变——磷酸化α-syn增多及α-syn聚集，仍值得进一步探究。
第三部分帕金森病小鼠模型中CIP2A表达增加
目的：建立PD小鼠模型，观察小鼠脑内黑质区域CIP2A分子的表达情况。
方法：成年C57/B6J雄性小鼠随机分为MPTP亚急性干预组(MPTP30mg/kg/d，连续腹腔注射1周)与野生型(WT)对照组(连续腹腔注射等体积生理盐水1周)，通过转棒实验及爬杆实验评价小鼠的运动协调以及平衡能力，利用免疫荧光及WesternBlot观察小鼠黑质致密部TH阳性神经元表达情况，证实模型成功。免疫荧光、免疫组化染色以及WesternBlot观察小鼠黑质区域CIP2A的表达水平变化。
结果：MPTP小鼠运动协调能力下降，黑质致密部TH阳性染色神经元明显减少，TH表达减低，提示模型构建成功。PD模型组小鼠黑质区域CIP2A表达增加。结论：成功建立PD小鼠模型，在PD小鼠模型中，亦有CIP2A蛋白水平升高，与细胞模型中表现一致，进一步探究CIP2A在PD中的作用机制很有必要。
第四部分敲低CIP2A对帕金森病细胞模型的保护作用
目的：构建靶向CIP2A的小干扰RNA(siRNA)转染SH-SY5Y细胞，敲低CIP2A蛋白水平，并在此基础上建立PD模型，观察敲低CIP2A对PD病理的作用。方法：根据既往文献报道及已公布的序列数据设计合成3条siRNA，瞬时感染SH-SY5Y细胞，WesternBlot评估3条siRNA的干扰效果。筛选干扰效果佳的siRNA进行后续PD细胞模型的建立。SH-SY5Y细胞分为四组：对照组、siRNA干预组、鱼藤酮造模组、siRNA干预+鱼藤酮造模组，细胞免疫荧光以及WesternBlot检测下游可能的关联蛋白的变化，包括CIP2A、α-syn、磷酸化α-syn、PP2A的表达改变。
结果：所构建的3个siRNA均有很好的干扰效果。敲低CIP2A蛋白水平后，PP2A蛋白表达有所增多，也改善了鱼藤酮引起的PD样病理，α-syn及磷酸化α-syn较鱼藤酮组明显减少。
结论：敲低CIP2A蛋白水平，对鱼藤酮构建的PD细胞模型有保护作用。这一保护作用，可能由于敲低CIP2A导致PP2A活性增加，减少了磷酸化的α-syn所致。
目的：比较帕金森病(PD)患者与健康对照者外周血浆CIP2A浓度水平。
方法：抽取临床诊断为原发性PD患者与健康对照者的外周血，离心获得血浆。收集PD患者与健康对照者的基本信息，包括姓名、年龄、性别、病程，PD患者还需收集量表信息包括统一帕金森氏症评定量表第三部分(UPDRS-III)、简易智力状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估表(MoCA)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)。通过定量ELISA法测定临床确诊的原发性PD患者以及年龄和性别匹配的健康对照者的血浆CIP2A浓度。采用曼惠特尼U检验对PD组与对照组血浆CIP2A浓度行统计学分析，做出相应受试者工作特征(ROC)曲线，计算曲线下面积，获得该指标的检测特异度与灵敏度。相关性分析评估CIP2A与临床运动及非运动症状之间是否存在相关性。
结果：PD患者组的血浆CIP2A浓度显著低于年龄和性别相匹配的对照组，分别为1.721(1.435-2.428)ng/ml和3.051(2.36-5.475)ng/ml；P<0.0001。ROC曲线中，能够将PD患者与年龄和性别匹配的正常对照者区分开来的血浆CIP2A曲线下面积为0.776，表明可将CIP2A血浆浓度作为诊断PD的指标，其截断值2.528ng/ml，灵敏度80.65%，特异度69.84%。将血浆CIP2A浓度与UPDRS-III、MMSE、MoCA、HAMD、HAMA的量表评分进行相关性分析，结果显示，PD患者血浆CIP2A浓度与各量表评分无明显相关。
结论：与健康对照者相比，PD患者血浆CIP2A浓度明显较低，或可作为PD患者潜在的诊断标志物。PD患者外周血血浆中CIP2A浓度与其认知水平、运动功能损害程度、抑郁和焦虑程度均无相关性，故PD患者血浆CIP2A浓度不适用于监测疾病进展。
第二部分帕金森病细胞模型中CIP2A分子表达增加
目的：观察PD细胞模型中CIP2A分子表达情况及对应的病理改变。
方法：在SH-SY5Y细胞系经CCK8摸索鱼藤酮造模的适宜浓度。建立PD鱼藤酮细胞模型并验证模型是否成功，细胞免疫荧光及WesternBlot比较CIP2A表达在造模前后的改变，以及鱼藤酮模型下α-syn、磷酸化α-syn、PP2A表达变化。结果：经鱼藤酮处理后，在细胞水平出现PD样改变，如α-syn、磷酸化α-syn表达增加，这些均表明PD鱼藤酮细胞模型的成功建立。检测CIP2A水平，发现鱼藤酮处理后CIP2A表达水平升高，PP2A表达降低。
结论：CIP2A蛋白水平在鱼藤酮造模后表达升高，其下游PP2A蛋白表达降低，这一改变可能是导致α-syn、磷酸化α-syn表达增加的原因。CIP2A是否通过降低PP2A活性引起PD的病理性改变——磷酸化α-syn增多及α-syn聚集，仍值得进一步探究。
第三部分帕金森病小鼠模型中CIP2A表达增加
目的：建立PD小鼠模型，观察小鼠脑内黑质区域CIP2A分子的表达情况。
方法：成年C57/B6J雄性小鼠随机分为MPTP亚急性干预组(MPTP30mg/kg/d，连续腹腔注射1周)与野生型(WT)对照组(连续腹腔注射等体积生理盐水1周)，通过转棒实验及爬杆实验评价小鼠的运动协调以及平衡能力，利用免疫荧光及WesternBlot观察小鼠黑质致密部TH阳性神经元表达情况，证实模型成功。免疫荧光、免疫组化染色以及WesternBlot观察小鼠黑质区域CIP2A的表达水平变化。
结果：MPTP小鼠运动协调能力下降，黑质致密部TH阳性染色神经元明显减少，TH表达减低，提示模型构建成功。PD模型组小鼠黑质区域CIP2A表达增加。结论：成功建立PD小鼠模型，在PD小鼠模型中，亦有CIP2A蛋白水平升高，与细胞模型中表现一致，进一步探究CIP2A在PD中的作用机制很有必要。
第四部分敲低CIP2A对帕金森病细胞模型的保护作用
目的：构建靶向CIP2A的小干扰RNA(siRNA)转染SH-SY5Y细胞，敲低CIP2A蛋白水平，并在此基础上建立PD模型，观察敲低CIP2A对PD病理的作用。方法：根据既往文献报道及已公布的序列数据设计合成3条siRNA，瞬时感染SH-SY5Y细胞，WesternBlot评估3条siRNA的干扰效果。筛选干扰效果佳的siRNA进行后续PD细胞模型的建立。SH-SY5Y细胞分为四组：对照组、siRNA干预组、鱼藤酮造模组、siRNA干预+鱼藤酮造模组，细胞免疫荧光以及WesternBlot检测下游可能的关联蛋白的变化，包括CIP2A、α-syn、磷酸化α-syn、PP2A的表达改变。
结果：所构建的3个siRNA均有很好的干扰效果。敲低CIP2A蛋白水平后，PP2A蛋白表达有所增多，也改善了鱼藤酮引起的PD样病理，α-syn及磷酸化α-syn较鱼藤酮组明显减少。
结论：敲低CIP2A蛋白水平，对鱼藤酮构建的PD细胞模型有保护作用。这一保护作用，可能由于敲低CIP2A导致PP2A活性增加，减少了磷酸化的α-syn所致。