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背景和目的恶性黑色素瘤是一种来源于黑色素细胞、痣细胞的高度恶性肿瘤，多发生于皮肤，占所有皮肤恶性肿瘤的第三位，恶性黑色素瘤恶性程度高，易发生血道转移。目前恶性黑色素瘤通常采用的治疗方法包括手术切除、生物治疗、放射治疗及化学治疗，效果均不理想。传统化疗对恶性黑色素瘤的疗效较差，氮烯咪胺(dacarbazine，DTIC)仍是目前最有效的药物，其有效率近20％，而环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)的有效率仅16％。因此，寻求疗效好、毒副作用小的新的治疗方法和药物是肿瘤学者研究的热点问题。三氧化二砷是中药砒霜的主要成分，其不仅在白血病治疗上有很好的作用，而且在治疗肝癌、结肠癌、膀胱癌等实体肿瘤上也有明显的作用。近年来，砷剂作为抗恶性黑色素瘤药物的研究和应用也有了深入的发展，业已证实三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞和B16细胞的增殖具有抑制作用。α-干扰素(interferon-α，IFN-α)是抗恶性黑色素瘤活性较强的生物因子，其对恶性黑色素瘤的生物作用包括抗细胞增殖作用及上调细胞表面组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)的免疫作用。在恶性肿瘤的治疗中，化疗与免疫治疗联合应用常较单一疗法效果好。砷剂联合干扰素用于恶性黑色素瘤的治疗国内外尚未见报道。为此，本研究旨在建立恶性黑色素瘤B16细胞的C57BL／6小鼠荷瘤动物模型，体内观察三氧化二砷联合干扰素对恶性黑色素瘤的抑制作用，并初步探讨了三氧化二砷联合干扰素抗恶性黑色素瘤作用的可能机制，为临床应用提供实验依据。方法1．制备恶性黑色素瘤B16细胞悬液。取已于河南省医学科学研究所经过稳定传代的腋部皮下接种恶性黑色素瘤B16细胞14天的C57BL／6荷瘤小鼠，在无菌条件下从腋部皮下剥取瘤体，剔除纤维包膜和坏死组织，取生长良好的肿瘤组织，在无菌平皿中剪碎，置组织研磨器中加适量生理盐水，轻轻研磨，200目尼龙网过滤，制成瘤细胞悬液。0.4％台盼蓝染色后细胞计数板计数，细胞活力大于95％，以无菌生理盐水调细胞浓度为5×10~6个／mL。2．C57BL／6小鼠恶性黑色素瘤B16细胞的接种、分组及处理。(1)50只小鼠用上述瘤细胞悬液0.2mL(含瘤细胞数1×10~6个)接种于右腋部皮下，接种后随机分为5组，每组10只。分组如下：①三氧化二砷组：腹腔注射三氧化二砷0.1mg／20g／d，连续给药10天；②干扰素组：皮下注射干扰素5万U／20g／d，连续给药10天；③联合用药组：三氧化二砷和干扰素按上述方法、剂量给药，连续给药10天；④阳性对照组(CTX组)：注射CTX 100mg／kg／d，仅第一天给药；⑤阴性对照组：注射等容量无菌生理盐水，连续注射10天。每日观察各组小鼠的生长情况，隔日称重，记录各组小鼠给药期间体重变化。停药后次日处死小鼠，剥离肿瘤组织称重并保留瘤组织。按抑瘤率=(阴性对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)／阴性对照组平均瘤重×100％的公式，计算抑瘤率。用上述保留的肿瘤组织进行HE染色，观察各组小鼠肿瘤组织的病理形态学变化。(2)另取50只小鼠，按与(1)同样的方法接种并分组，每日观察各组小鼠的生长情况，并记录小鼠的自然死亡时间，计算每组小鼠的平均生存期。3．统计学处理。应用统计软件SPSS11.5进行统计学处理，统计方法采用t检验和χ~2检验。以α=0.05作为检验水准。结果1．三氧化二砷联合干扰素对小鼠恶性黑色素瘤的抑制作用阴性组的瘤重为0.6532±0.1562g，三氧化二砷组的瘤重为0.4055±0.1287g，其抑瘤率为37.92％；干扰素组的瘤重为0.5001±0.0538g，其抑瘤率为23.34％；联合用药组的瘤重为0.3756±0.1953g，其抑瘤率为42.49％；CTX组的瘤重为0.3435±0.0843g，其抑瘤率为47.41％。三氧化二砷组与干扰素组抑瘤率相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。联合用药组与干扰素组抑瘤率相比，差异有统计学意义(P＜0.05)；联合用药组比三氧化二砷组及阳性对照组的抑瘤率高，但无明显统计学差异(P＞0.05)。2．三氧化二砷组、联合用药组和CTX组与阴性对照组相比成瘤时间较晚，肿瘤生长较缓慢。三氧化二砷组、干扰素组、联合用药组、CTX组及阴性组的平均生存期分别为32.1±4.3天、26.9±3.5天、37.2±5.1天、29.0±3.9天、23.1±3.6天。联合用药组生存期与三氧化二砷组、干扰素组及CTX组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，联合用药组对荷瘤小鼠生存期的延长最为明显。3．小鼠恶性黑色素瘤B16细胞实体瘤为球形结节状，质细嫩，切面呈鱼肉状。阴性对照组瘤体体积明显大于三氧化二砷组、联合组及阳性对照组，肿瘤多呈侵袭性生长，有的甚至侵袭至胸骨、锁骨等处，与周围组织分界不清，难以剥离。三氧化二砷组及联合用药组小鼠的瘤体较小，形状规则，易剥离。与其它组小鼠相比，三氧化二砷组及联合组小鼠瘤体血管数量明显较少。阴性对照组肿瘤细胞呈弥漫状分布，细胞呈类圆形，轮廓清楚，核大，核仁明显，间质血管明显。与阴性对照组相比，三氧化二砷组及联合用药组瘤组织有片状坏死区，瘤细胞有核固缩等细胞形态学变化；而干扰素组细胞形态无明显变化。结论1．三氧化二砷对小鼠黑色素瘤B16细胞具有体内抑瘤效应，但抑瘤率与CTX相比并无明显差异。2．干扰素抑瘤效应较小，但有一定延长生存时间的作用。3．三氧化二砷联合干扰素对小鼠恶性黑色素瘤B16细胞具有体内抑瘤效应，虽然抑瘤率与CTX组相比无明显差异，但能明显延长荷瘤小鼠的平均生存时间，且耐受性较好。