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目的观察血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7联合作用对SD大鼠颅骨来源的成骨细胞增殖和分化的影响。方法1．取材：取24小时内新生SD大鼠，雌雄不限，拉颈处死。无菌条件下取头盖骨，收集成骨细胞用于培养。2．细胞培养：细胞在DMEM中常规条件下培养，细胞接近融合成单层时，用0.25％胰蛋白酶常规消化，在倒置相差显微镜下观察至细胞分离、脱壁后，终止消化。收集消化所得的细胞。本实验所用的细胞为第3～5代。3．细胞鉴定(1)活体相差显微镜观察(2)碱性磷酸酶(ALP)染色(3)矿化结节染色(四环素标记法、茜素红法)4．观察不同浓度血管内皮生长因子(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000ng／ml)、骨形态发生蛋白-7(0.500、1.000、5.000、10.000、50.000ng／ml)对成骨细胞增殖和分化的影响；观察血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7联合作用对成骨细胞增殖和分化的影响：(1) MTT法检测细胞增殖(2) PNPP偶氮法检测细胞的ALP活性结果1．不同浓度血管内皮生长因子(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000ng／ml)对成骨细胞增殖和分化的影响。(1) MTT法检测细胞增殖与对照组比较，五组中成骨细胞均有增殖，3.125ng／ml、6.250ng／ml、12.500ng／ml三组较明显，其与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05)，各组间比较差异也有显著性(P＜0.05)，其中3.125 ng／ml组对成骨细胞的增殖作用最显著。(2) ALP活性检测各组与对照组比较对碱性磷酸酶活性具有促进作用，其中加入6.250ng／ml、12.500ng／ml、25.000ng／ml的三组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05)，但各组间比较无统计学意义(P＞0.05)，其中12.500ng／ml组对碱性磷酸酶活性的影响高于其他组。2．不同浓度骨形态发生蛋白-7(0.500、1.000、5.000、10.000、50.000ng／ml)对成骨细胞增殖和分化的影响。(1) MTT法检测细胞增殖与对照组比较，五组中成骨细胞均有增殖，10.000ng／ml、50.000ng／ml两组较明显，其与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05)，各组间比较差异也有显著性(P＜0.05)，其中50.000ng／ml组对成骨细胞的增殖作用最显著。(2) ALP活性检测各组与对照组比较对碱性磷酸酶活性具有促进作用，其中加入1.000ng／ml、5.000ng／ml、10.000ng／ml、50.000ng／ml的四组与对照组比较有统计学意义(P＜0.05)，各组间比较有统计学意义(P＜0.05)，其中50.000ng／ml组对碱性磷酸酶活性的影响高于其他组(P＜0.01)。3．血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7联合作用对成骨细胞增殖和分化的影响：(1) MTT法检测细胞增殖与对照组相比，血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7联合作用有促进细胞增殖的作用。其与对照组的差异有统计学意义(P＜0.05)，各组间比较差异也有显著性(P＜0.05)。联合作用在第3天时对细胞增殖作用最显著(P＜0.01)。(2) ALP活性检测与对照组相比，血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7两者联合作用可提高碱性磷酸酶活性。各天实验中联合作用组对增强细胞碱性磷酸酶活性的作用均比单用组高。其中在第3天时对细胞碱性磷酸酶活性增强作用最显著(P＜0.01)。结论血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-7对骨代谢均有影响。二者单独或联合作用均可促进成骨细胞的增殖和分化。因此，二者联合作用无论在骨代谢研究上，还是对骨组织工程研究均有现实意义，为其临床运用提供了实验依据。但关于二者联合作用的详细机制有待于进一步探讨。