【摘 要】
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花脸香蘑（Lepista sordida）是一种草腐菌,蕴含了人体必需的微量元素,低脂肪、高蛋白使其拥有较大的食用价值,此外,花脸香蘑多糖具有抗氧化、抗肿瘤和抗衰老等功效,使其具有极大的药用价值。但目前在中国,花脸香蘑的野生资源稀少,可栽培的优异种质资源稀缺且人工栽培难度大,导致其大规模栽培和产业化开发与利用受到严重制约,选育高产多糖的花脸香蘑菌株不仅丰富了食用菌种质资源,也对花脸香蘑及其多糖开发
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花脸香蘑（Lepista sordida）是一种草腐菌,蕴含了人体必需的微量元素,低脂肪、高蛋白使其拥有较大的食用价值,此外,花脸香蘑多糖具有抗氧化、抗肿瘤和抗衰老等功效,使其具有极大的药用价值。但目前在中国,花脸香蘑的野生资源稀少,可栽培的优异种质资源稀缺且人工栽培难度大,导致其大规模栽培和产业化开发与利用受到严重制约,选育高产多糖的花脸香蘑菌株不仅丰富了食用菌种质资源,也对花脸香蘑及其多糖开发利用起促进作用。另一方面国内外有关花脸香蘑内参基因筛选和从基因表达量角度研究多糖代谢机制的相关报道极少。为此展开了以下研究:（1）以花脸香蘑LS01菌株为实验对象,制备其原生质体单核体菌株LS01＿10,再以LS01＿10为出发菌株,利用等离子诱变技术选育高产胞外多糖的花脸香蘑菌株。在诱变功率为200 W,诱变时间为60 S的条件下,初步获得50个诱变株,筛选到5个性状稳定遗传的高产胞外多糖诱变菌株,其胞外多糖的含量是出发菌株的1.2-2.4倍。诱变菌株的菌丝形态和颜色在一定程度上都发生了变化,且生物量均比出发菌株高。ISSR实验表明,相比出发菌株,诱变菌株在遗传水平上发生了不同程度的变化。多糖高产的诱变菌株为初步解析多糖高产机制提供了重要的种质资源。（2）通过测定花脸香蘑发酵胞外多糖水溶液清除DPPH自由基、羟自由基（·OH）和ABTS阳离子自由基能力,分析和评价花脸香蘑体外抗氧化活性。结果表明在相同样品浓度下,以葡萄糖、蔗糖、甘露醇和麦芽糖为碳源,不同花脸香蘑菌株体外抗氧化活性存在差异,以甘露醇为碳源时,LS01＿10＿B对·OH清除率最高达到91.7%;以葡萄糖为碳源时,LS01＿10＿B对DPPH清除率最高达到25.0%;对ABTS阳离子无清除作用。葡萄糖可作为花脸香蘑诱变菌株粗多糖清除DPPH自由基最佳碳源,甘露醇可作为花脸香蘑诱变菌株粗多糖清除羟自由基（·OH）最佳碳源。（3）利用荧光定量PCR技术从9个候选内参基因中筛选花脸香蘑（Lepista sordida）最适内参,并检测花脸香蘑高产胞外多糖诱变菌株及其出发菌株11个多糖合成途径关键基因和7个多糖代谢途径基因表达量。结果表明:表达丰度高、扩增效率较强且稳定的基因有核糖体蛋白L4（ribosomal protein L4,rpl4）基因和3-磷酸甘油脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,gapdh）,是花脸香蘑荧光定量PCR最佳的内参基因。与出发菌株LS01＿10相比,胞外多糖高产的诱变菌株LS01＿10＿9中发现5个参与多糖合成途径的关键基因GK、GMD-3、UGE、UGDG、PFK表达量明显增加,4个参与多糖代谢途径的基因GT-1、GT-2、NOX-3、NOX-4表达量明显增加。进一步从遗传水平基因表达的角度初步探讨诱变株高产胞外多糖机制。
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