论文部分内容阅读
目的：建立ox-LDL诱导大鼠主动脉内皮细胞凋亡的模型，观察黄芩提取物黄芩苷预处理细胞后对细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的表达的影响，探讨黄芩苷保护内皮细胞的可能机制及FGF21在AS发展中的可能作用，为天然药物黄芩苷在AS相关疾病的防治的应用提供新的理论依据。方法：取标准体重雄性Wistar大鼠胸主动脉后采用植块法提取原代胸主动脉内皮细胞，采用细胞免疫组化法测定细胞胞浆Ⅷ因子相关抗原，鉴定内皮细胞。细胞传代并分组：待原代大鼠主动脉内皮细胞生长密度达60-70%左右时将细胞分成正常对照组、ox-LDL刺激组和黄芩苷处理组，正常对照组继续用正常的10%FBS的ECM培养液培养，另外两组分别向培养液中滴加ox-LDL和黄芩苷，且各自浓度分别调至10ug/ml、25ug/ml、50ug/ml三个浓度梯度，即细胞经上述处理后分为7个亚组，每个亚组重复3个复孔，培养24小时后用流式细胞仪测定细胞凋亡情况，RT-PCR测定FGF21、Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达量，ELISA法测定细胞培养液中FGF21蛋白的含量。根据以上处理结果，选用50ug/ml黄芩苷预处理正常传代后生长密度达70%左右的内皮细胞6小时后再滴加ox-LDL使后者浓度达50ug/ml，重复3个复孔，继续培养24小时，重复测定上述指标。结果：（1）与正常对照组相比，不同浓度的ox-LDL刺激后细胞凋亡率明显升高（P<0.01），且ox-LDL促进细胞凋亡具有浓度依赖性；不同浓度的黄芩苷刺激后可以明显抑制内皮细胞凋亡（P<0.01），并表现为一定的浓度依赖性；与同浓度ox-LDL刺激组相比，黄芩苷50ug/ml+ox-LDL50ug/ml刺激组细胞凋亡率明显降低（P<0.01），但高于正常对照组。（2）与正常对照组相比，ox-LDL和黄芩苷刺激组培养液中FGF21的表达量均有所增加，但黄芩苷刺激组的表达量增加更显著（P<0.01）；与同浓度ox-LDL刺激组和正常对照组相比，黄芩苷50ug/ml+ox-LDL50ug/ml刺激组培养液中FGF21的表达量明显升高（P<0.01）。（3）与正常对照组相比，不同浓度的ox-LDL刺激细胞FGF21、Bcl-2、Caspase-3和Bax mRNA的表达量均升高（P<0.05，P<0.01），Bax/Bcl-2比值增加（P<0.01）；不同浓度的黄芩苷刺激后FGF21、Bcl-2mRNA的表达量升高（P<0.01），而Caspase-3、Bax mRNA的表达量明显降低（P<0.01），Bax/Bcl-2比值降低（P<0.01）；与同浓度ox-LDL刺激组和正常对照组相比，黄芩苷50ug/ml+ox-LDL50ug/ml刺激组FGF21、Bcl-2mRNA的表达量明显升高（P<0.01）；Bax、Caspase-3的表达量以及Bax/Bcl-2比值较正常对照组升高，较同浓度ox-LDL刺激组均降低（P<0.01）。结论：（1）ox-LDL可以刺激动脉内皮细胞发生凋亡，并表现出一定的浓度依赖性；（2）黄芩苷具有抑制动脉内皮细胞凋亡的功能，对保护血管，预防内皮细胞损伤具有重要意义，且其保护性作用在一定范围内表现出浓度依赖性；（3）在ox-LDL诱导细胞凋亡和黄芩苷抑制凋亡的过程中，FGF21的表达量均有提高，且在黄芩苷发挥保护性作用时其浓度升高更明显，可以推测FGF21作为一种细胞保护因子，参与对内皮细胞的保护，抑制内皮细胞的凋亡；（4）黄芩苷抑制动脉内皮细胞凋亡可能是通过增强FGF21、Bcl-2的表达，减少Caspase-3、Bax的活化并降低Bax/Bcl-2的比值实现的。