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目的:本实验构建高通量组织芯片/组织微阵列探讨Fas-FasL在结肠腺癌组织中表达与局部浸润淋巴细胞凋亡之间的关系;探讨结肠粘膜上皮细胞恶性转化过程中不同时相Fas、FasL的表达情况,以及TILs的种类、数量与肿瘤免疫的关系;进一步探讨组织芯片应用可行性。
方法:选取收集结肠手术切除标本和相应的临床资料,分为七组:正常结肠粘膜上皮7例;结肠良性增生性息肉8例;结肠腺瘤8例;结肠腺瘤(伴Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级不典型增生)46例;结肠腺癌(高、中、低分化)48例;粘液腺癌16例;淋巴结转移癌16例。应用组织芯片和免疫组织化学链酶菌抗生物素一过氧化物酶染色法、末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记法细胞原位凋亡染色双重标记,检测结肠粘膜上皮细胞和TILs中的Fas、FasL表达和TILs中CD45、CD20cy的表达。用TUNEL法检测凋亡的结肠粘膜上皮细胞和TILs,分别用辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶两种酶系统显色,在同一结肠组织芯片上从蛋白水平和DNA水平观察相关抗原的表达情况和凋亡细胞的形态特点,并定量分析癌细胞和TILs的凋亡指数(AI),以及用免疫组织化学方法定量分析TILs的种类和数量,探讨在恶性肿瘤中机体免疫情况。
结论:①组织芯片是一种制作简单、技术可靠、费用低、易推广的新技术。②从正常结肠粘膜上皮细胞向结肠腺癌转化的过程中,结肠粘膜上皮细胞中Fas的表达量逐渐减少,FasL表达量逐渐增多,结肠腺癌细胞的AI逐渐下降,TILs的AI逐渐增高,结肠腺癌细胞通过Fas-FasL系统的作用,清除癌旁TILs,提示Fas-FasL系统在结肠腺癌的免疫逃避及免疫反击中起重要作用。③Fas、FasL的表达与结肠腺癌的临床病理学特征密切相关,可能对结肠腺癌早期诊断,病理分级,临床分期和评估预后有一定指导作用。④T淋巴细胞在肿瘤免疫中发挥重要作用。