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目的(1)探索裸鼠胶质瘤原位模型的建立方法。通过培养人神经胶质瘤U87MG细胞并将其接种于裸鼠颅内,掌握建立裸鼠胶质瘤原位模型的有效条件和方法。(2)研究裸鼠胶质瘤原位模型经不同方法检测的敏感性和可靠性。通过对裸鼠脑胶质瘤原位模型进行MRI扫描和活体成像检测,探讨本研究的最佳检测方法。(3)研究脑瘤一号方联合替莫唑胺(temozolomide,TMZ)治疗脑胶质瘤原位模型的疗效,探究其作用机制与O~6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、死亡受体(Fas)、促凋亡因子Bax、抗凋亡因子Bcl-2和血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法(1)培养人神经胶质瘤细胞U87MG细胞,制备浓度为1×10~7/m L的细胞悬液,以10μL/只注射于BALB/c裸鼠纹状体,每只裸鼠接种细胞数为1×10~5,共10只,建立裸鼠胶质瘤原位模型,2周后解剖建模裸鼠,观察成瘤情况。(2)荧光素mcherry转染人神经胶质瘤细胞U87MG细胞,培养能稳定表达荧光素酶的细胞株(U87MG-Luc),建立裸鼠胶质瘤原位模型5只,1周后,每周2次分别以活体成像系统和MRI扫描检测肿瘤体积,探讨两种检测方法的优劣并确定最适宜的检测方法。(3)建立裸鼠胶质瘤原位模型36只,成瘤裸鼠(荧光量≥1×10~5)随机分为模型组、脑瘤一号方组、低TMZ组(25 mg/kg)、高TMZ组(50 mg/kg)、低TMZ联合脑瘤一号方组(低联合组)和高TMZ联合脑瘤一号方组(高联合组),共6组,每组6只,连续口服给药12天,每3天检测一次裸鼠体重、肿瘤体积,给药结束后(第13天)取材,HE染色法检测瘤块组织病理,Tunel法检测组织凋亡,Western Blot检测MGMT、Fas、Bax、Bcl-2和VEGF的表达。结果(1)人神经胶质瘤细胞U87MG接种于BALB/c裸鼠纹状体的细胞数约1×10~5/只,接种体积10μL,共10只,2周后,1只裸鼠死亡,解剖其余裸鼠均肉眼可见建模成功。(2)初成瘤时(建模1周),活体成像系统检测裸鼠荧光量级为10~5和10~6量级,此时MRI扫描未检测出肿瘤;当活体成像系统检测裸鼠荧光量级为10~7时,MRI扫描肿瘤体积为14.625 mm~3;当活体成像系统检测裸鼠荧光量级为10~8时,MRI扫描肿瘤体积为19 mm~3;当活体成像系统检测裸鼠荧光量级为10~9时,MRI扫描肿瘤体积为35.525 mm~3。活体成像系统以肿瘤细胞荧光量间接反应肿瘤体积,灵敏度高且与MRI扫描出的肿瘤体积呈正相关。(3)与模型组相比,脑瘤一号方组、低TMZ组、高TMZ组、低联合组和高联合组肿瘤体积显著减少(P<0.05),低TMZ组和高TMZ组肿瘤组织MGMT表达明显增加(P<0.01),脑瘤一号方组、低TMZ组、高TMZ组、低联合组和高联合组肿瘤组织Fas表达均显著增加(P<0.01),高TMZ组、低联合组与高联合组中Bax表达显著增加(P<0.05),低联合组和高联合组Bcl-2表达显著减少(P<0.05),低联合组和高联合组Bax/Bcl-2比率增加有统计学意义(P<0.05),高TMZ组裸鼠体重明显减少(P<0.05)。结论(1)裸鼠原位模型建立的最佳细胞接种数为1×10~5/只,成活率90%,成瘤率100%。(2)肿瘤体积最佳检测手段为活体成像系统。(3)脑瘤一号方与TMZ联合治疗胶质瘤能提高疗效、降低副作用,缓解胶质瘤细胞对TMZ的耐药性,作用机制与下调MGMT表达和上调Fas表达和Bax/Bcl-2比率有关。