论文部分内容阅读
目的:多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)是由于骨髓中浆细胞恶性增殖所导致的肿瘤,发病率在血液系统恶性肿瘤中排第2位。蛋白酶体抑制剂(PIs),特别是硼替佐米(Proteasome inhibitors,BTZ),由于其可明显改善MM患者的总生存率达到前所未有的疗效而备受关注,但目前仍不能使该疾病治愈。然而,PIs治疗MM会出现一系列副作用,以周围神经炎(Peripheral Neuropathy,PN)这种并发症最为突出,这严重影响MM患者的后续治疗和生活质量。我们观察到在相似的治疗计划下,即使按体表面积换算使用同等剂量的硼替佐米,有些患者出现PN,而另一些没有这种副作用,个体之间的变异和易感性被观察到与发生药物相关的不良事件有关。有文献报道,硼替佐米导致周围神经炎(Bortezomib-induced Peripheral Neuropathy,BIPN)的这种不可预测性部分归因于遗传差异,值得进一步研究。目前,发生BIPN的遗传学因素及机制国内没有相关报道。本研究分析了可能相关的单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP)及所在基因,探讨了可能在BIPN中起重要作用的机制。如果将来有相应基因风险谱用于识别预测有发生BIPN风险的患者,可以提前将这部分患者筛选出,为指导临床治疗提供方便,最终使患者受益。本研究可挖掘针对中国人群应用硼替佐米治疗的药物反应相关变异位点,为这一领域的研究提供实验依据,为构建基于中国人群的药物基因组学数据提供参考。研究方法:本研究基于临床治疗多发性骨髓瘤一线用药硼替佐米的治疗反应相关的已知变异位点和重要基因及周围神经炎相关的已知变异位点和重要基因,与美思睿(北京)生物科技有限公司合作设计了一个基于多重PCR扩增技术的二代测序Panel,Panel包含25100个SNP位点,涉及550个基因,用于硼替佐米药物代谢、治疗及周围神经病相关基因检测。选取2019年5月10日至2021年11月10日间就诊于我院血液科明确诊断为多发性骨髓瘤,并且应用硼替佐米治疗的患者204例。完成了所有样本的入组、临床信息采集、随访和统计分析;完成了所有样本DNA的提取及Panel测序;应用RT-PCR方法,检测Panel测序中发现的SNPs所在基因m RNA的表达水平,我们选取了有文献报道的在外周血中有表达的MTHFR和ALDH1A1基因,检测62例外周血样本中上述2种基因在m RNA水平的表达情况,其中初诊未治的多发性骨髓瘤患者26例,应用硼替佐米治疗后的复治患者19例,同期健康体检患者17例作为对照组。通过统计学分析对比了患者临床信息、DNA测序结果数据集中变异位点和RT-PCR检测外周血m RNA表达情况在不同分组中的差异。结果:第一部分:本研究入组符合条件的多发性骨髓瘤患者204人,其中应用硼替佐米后出现周围神经炎副作用者115人,无周围神经炎者89人;伴有周围神经炎患者中一直按原方案治疗的轻型组(G1,G2无疼痛)77例,改治疗方案的重型组(G2伴疼痛,G3,G4)38例;周围神经炎发生率为56.4%,重型周围神经炎发生率为18.6%。有周围神经炎组与无周围神经炎组的患者在性别、年龄、血常规等临床基本信息上无统计学差别(P>0.05);有周围神经炎患者重型组与无周围神经炎组在性别、年龄、血常规等临床基本信息上无统计学差别(P>0.05)。第二部分:Panel测序结果发现,应用硼替佐米治疗后有周围神经炎组与无周围神经炎组患者相比,周围神经炎的发生可能与下列SNP位点有关:分别是MTHFR基因的rs1801131位点(T>G,变异频率(Allele Frequency,AF):0.217(有周围神经炎组)vs0.096(无周围神经炎组),OR=2.631,P=0.001;T/T>T/G,AF:0.383vs0.191,OR=2.743,P=0.002)、rs1801133位点(A>G,AF:0.678 vs0.466,OR=2.413,P=0.000;A/A>G/G,AF:0.530 vs0.393,OR=5.364,P=0.001)、rs17421511位点(G>A,AF:0.152vs0.039,OR=4.385,P=0.000;G/G>G/A,AF:0.304vs0.079,OR=5.132,P=0.000),EPHX1基因的rs1051740位点(C>T,AF:0.700vs0.472,OR=2.611,P=0.000;T/C>T/T,AF:0.496vs0.191,OR=3.566,P=0.000),MME基因的rs2016848位点(G>A,AF:0.348 vs0.124,OR=3.782,P=0.001;G/G>A/G,AF:0.330 vs0.112,OR=3.960,P=0.000),ALDH1A1基因的rs6151031位点(GCTG>G,AF:0.061 vs0.011,OR=5.704,P=0.010;GCTG/GCTG>G/GCTG,AF:0.122 vs0.022,OR=6.027,P=0.009),HTR7基因的rs1935349位点(C>T,AF:0.343 vs0.208,OR=1.994,P=0.003;C/C>T/T,AF:0.139 vs0.022,OR=8.313,P=0.002),CYP2A6基因的rs8192720位点(G/A>A/A,AF:0.130vs0,OR值无限大,P=0.001;G/G>A/A,AF:0.130 vs 0,OR值无限大,P=0.000)。以上位点及基因型两组间相比较,均满足OR>1且P≤0.01,差异均有统计学意义,各变异基因型在神经炎组变异率均高于无神经炎组,均为BIPN发生的风险核型。多因素模型分析显示,rs17421511位点的G/A基因型发生周围神经炎的风险是G/G基因型的9.578倍(P=0.002,OR=9.578(95%CI 2.296-39.955)),rs1051740位点的T/T基因型发生周围神经炎的风险是T/C基因型的6.030倍(P=0.001,OR=6.030(95%CI 2.000-18.181)),rs2016848位点的A/A基因型发生周围神经炎的风险是G/G基因型的4.925倍(P=0.026,OR=4.925(95%CI 1.213-19.996)),rs6151031位点的GCTG/G基因型发生周围神经炎的风险是GCTG/GCTG基因型的7.377倍(P=0.046,OR=7.377(95%CI 1.778-39.978))。第三部分:应用RT-PCR检测结果发现:(1)初诊未治组(C组)与正常对照组(N组)MTHFR m RNA表达水平相比较(2.55±1.02 vs 1.95±0.92,P=0.050),差异无统计学意义;复治组(F组)较正常对照组(N组)MTHFR m RNA表达水平增高(3.02±1.89 vs 1.95±0.92,P=0.041),差异有统计学意义;初诊未治组(C组)与复治组(F组)比较,MTHFR m RNA表达水平无差别(2.55±1.02 vs3.02±1.89,P=0.264);初诊组治疗后无周围神经炎患者(CN组)较治疗后有周围神经炎患者(CP组)MTHFR m RNA表达水平增高(2.81±0.97 vs 1.70±0.77,P=0.009),差异有统计学意义;在复治组无周围神经炎患者(FN组)与复治组有周围神经炎患者(FP组)MTHFR m RNA表达水平无差别(2.56±0.78 vs 3.30±2.31,P=0.426)。(2)C组与N组相比,ALDH1A1m RNA表达水平无差别(6.74±4.76 vs 4.63±5.67,P=0.182);F组较N组ALDH1A1m RNA表达水平增高(11.15±11.92 vs 4.63±5.67,P=0.048),差异有统计学意义;C组与F组比较,ALDH1A1 m RNA表达水平无差别(6.74±4.76 vs11.15±11.92,P=0.080);CN组与CP组比较,ALDH1A1 m RNA表达水平无差别(6.92±5.27vs 5.15±2.26,P=0.375);FN组与FP组比较,ALDH1A1m RNA表达水平无差别(16.24±17.23vs 8.15±6.67,P=0.159)。结论:MTHFR基因的rs1801131、rs1801133、rs17421511位点,ALDH1A1基因的rs6151031位点,EPHX1基因的rs1051740位点,MME基因的rs2016848位点,HTR7基因的rs1935349位点及CYP2A6基因的rs8192720位点的多态性与BIPN相关;其中MTHFR基因外周血m RNA表达水平在初诊组治疗后伴有BIPN患者与治疗后无BIPN患者间存在差别。本研究发现的SNPs位点所在基因分别为参与神经细胞发育和维持神经细胞功能的基因(ALDH1A1,HTR7,MME)、参与神经毒性物质向氨基酸转化代谢的基因(MTHFR)、参与硼替佐米药物代谢的基因(CYP2A6)及参与氧化应激和神经炎症反应的基因(EPHX1)。将来这些位点为寻找临床应用硼替佐米治疗后引发周围神经炎的遗传学标志提供理论和实验依据。