【摘 要】
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背景与目的:慢性应激也称长期应激,指长期处于压力下的状态。随着社会竞争越来越激烈,慢性压力现已成为损害人们身心健康的一个主要问题。研究发现,长期处于压力状态会影响女性生育力,导致女性生殖功能障碍,但机制尚未阐述清楚。嘌呤能受体P2X7（P2X7R）是ATP门控阳离子通道。有研究报道,P2X7R参与应激状态下多系统病理过程。而关于P2X7R是否参与慢性应激对女性生殖的影响尚未研究。本研究通过建立慢性
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背景与目的:慢性应激也称长期应激,指长期处于压力下的状态。随着社会竞争越来越激烈,慢性压力现已成为损害人们身心健康的一个主要问题。研究发现,长期处于压力状态会影响女性生育力,导致女性生殖功能障碍,但机制尚未阐述清楚。嘌呤能受体P2X7（P2X7R）是ATP门控阳离子通道。有研究报道,P2X7R参与应激状态下多系统病理过程。而关于P2X7R是否参与慢性应激对女性生殖的影响尚未研究。本研究通过建立慢性冷应激小鼠模型探究P2X7R是否介导了慢性应激引起的卵巢功能异常。研究方法:构建慢性冷应激小鼠模型,将小鼠随机分为两组,即对照组（Control）和慢性冷应激组（CCS）。对CCS小鼠进行8周的慢性冷应激处理,对照组小鼠在相应时间置于26℃的室内。每周称量体重,最后两周连续阴道涂片,观察小鼠动情周期变化。8周后处死小鼠,通过Elisa检测小鼠血清中皮质酮及孕酮含量;通过HE染色观察两组小鼠卵巢形态变化及黄体数量变化;通过免疫组织化学染色及蛋白免疫印迹检测两组小鼠卵巢中P2X7R表达量变化;对两组小鼠进行超数排卵处理,并注射P2X7R抑制剂A-438079HCL干预,观察各组小鼠排卵数量变化;通过天狼星红染色观察小鼠卵巢纤维化变化情况,并通过蛋白免疫印迹检测小鼠卵巢IL-1β及纤维化因子TGF-β1、MMP2表达变化;分别取14及21天小鼠初级卵泡及卵母卵丘复合体进行体外培养;P2X7R激动剂及抑制剂分别处理培养卵泡,动态观察卵泡发育及卵丘扩散情况。通过qPCR及EIA检测排卵相关因子表达变化,包括EGF、EGFR、EREG、AREG、BTC、NPPC、NPR2、PTGS2、HAS2、PTX3和TNFAIP6。研究结果:通过观察小鼠动情周期,发现慢性冷应激小鼠动情周期紊乱;Elisa检测到冷应激小鼠孕酮含量明显下降;通过HE染色观察到冷应激小鼠卵巢黄体数显著减少,黄体数目间接反映排卵状况,说明慢性冷应激影响排卵。通过免疫组织化学染色观察到卵泡颗粒细胞P2X7R表达增加,蛋白免疫印迹检测与上述结果一致。经超数排卵处理后,慢性冷应激组小鼠超排卵量较对照组明显减少,P2X7R激动剂BzATP处理后同样降低了小鼠超排卵量,而P2X7R拮抗剂A-438079 HCL部分缓解了上述处理所导致的排卵障碍。卵泡发育及卵丘细胞扩散是卵母细胞成熟和排卵的一个关键步骤。我们进一步观察了P2X7R激动剂BzATP对卵泡发育及排卵的影响,发现BzATP可以促进早期卵泡的发育,但是抑制了EGF诱导的卵丘扩散。机理研究表明P2X7R信号促进了颗粒细胞中排卵抑制因子NPPC的表达。此外,天狼星红染色结果表明慢性冷应激模型中卵巢纤维化明显增加。炎性及纤维化相关因子IL-1β和TGF-β1表达增加,MMP2降低。我们还研究了P2X7R激活对颗粒细胞中纤维化调节因子表达的影响,发现P2X7R激动剂BzATP处理细胞促进TGF-β1的表达,并降低MMP2的表达。P2X7R拮抗剂A-438079HCL缓解了P2X7R激动剂BzATP对TGF-β1和MMP2表达的影响。结论:1、P2X7R在慢性冷应激小鼠模型的卵巢中表达增加,P2X7R及其诱导的NPPC表达增加介导了慢性冷应激小鼠排卵障碍。2、P2X7R通过调节炎症因子及纤维化相关因子（包括IL-1β、TGF-β1和MMP2）表达增加了慢性冷应激小鼠卵巢的纤维化。
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