【摘 要】
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目的:探究熊去氧胆酸对胆管结扎大鼠的肝脏炎症病变及血糖影响的研究。方法:选择健康雄性6-8周龄大小的SD大鼠32只,随机分为四组:A组（正常组,n=8）,不作任何处理,B组（假手术组,n=8）开腹后只游离胆管不结扎,C组（实验组,n=8）开腹后行胆管结扎,D组（干预组,n=8）在C组基础上,术后5天给予熊去氧胆酸干预（按进食量的0.25%,方式:灌胃,每日1次）。观察各组SD大鼠术后一般状态,于术
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目的:探究熊去氧胆酸对胆管结扎大鼠的肝脏炎症病变及血糖影响的研究。方法:选择健康雄性6-8周龄大小的SD大鼠32只,随机分为四组:A组（正常组,n=8）,不作任何处理,B组（假手术组,n=8）开腹后只游离胆管不结扎,C组（实验组,n=8）开腹后行胆管结扎,D组（干预组,n=8）在C组基础上,术后5天给予熊去氧胆酸干预（按进食量的0.25%,方式:灌胃,每日1次）。观察各组SD大鼠术后一般状态,于术后4周时将A、B、C、D组称取体重,处理时称取肝重,并计算肝指数（肝重/体重,%）,测定糖耐量试验,测定血清总胆汁酸（TBA）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、白蛋白（ALB）浓度,肝脏HE染色、masson染色观察有无出现肝纤维化,用免疫组化测定各组肝脏炎症因子NF-KB-p65、IKBα表达的变化。结果:术后3天,B组大鼠在日进食量、巩膜、尿液颜色、一般精神状态与A组相比未见明显变化,C组大鼠较B组均可见眼睛、耳尖及尾部出现明显黄疸,尿液颜色加深变成深黄色,日进食量减少,大便颜色变浅,D组较C组相比未见明显差异。术后4周,B组大鼠在日进食量、巩膜、尿液颜色、一般精神状态与A组相比未见明显变化。C组较B组精神稍差、日进食量减少,可见耳缘仍可见到黄染,尿液颜色大致相同,大便颜色颜色稍浅,较干燥,4周后C组大鼠打开腹腔可看到充盈的胆管;D组较C组相比精神相仿,耳缘黄染程度较轻,日进食量有所增加,尿液颜色及大便情况基本一样。B组的体重增加率（体重增加率=（术后4周体重-术后0周体重）/术后0周体重）A组相比,B组体重增加率未见明显差别（P＞0.05）,与B组相比,C组体重增加率明显降低（P＜0.05）,与C组相比,D组体重增加率明显增加（P＜0.05）。B组肝指数较A组未见明显差异（P＞0.05）,C组的肝指数较B组相比明显增高（P＜0.05）,D组肝指数较C组有降低趋势（P＞0.05）。A、B、C、D组都于4周后处理,心脏采血,分别离心取上清液后测定ALT、AST、TBA、ALB指标。B组ALT、AST、TBA、ALB指标较A组未见明显变化（P＞0.05）;C组4周后AST、ALT、TBA较B组明显增高（P＜0.05）,C组ALB较B组明显降低（P＜0.05）;D组ALB较C组明显增高（P＜0.05）,D组AST、ALT较C组有降低趋势（P＞0.05）。显微镜下观察HE染色示:B组可见肝小叶条索状排列整齐,胆管未见明显扩张,肝细胞未见明显坏死。C组可见胆管扩张,周围可见纤维条索,肝小叶结构紊乱。D组可见胆管轻度扩张,周围未见明显纤维条索。masson染色是可以将胶原纤维染成蓝色。显微镜下masson染色观察:B组肝脏可见肝小叶整齐排列,胞浆染成深红色,周围未见明显蓝色。C组可见胆管周围有明显染成蓝色纤维条索形成。D组可见肝小叶局部及胆管周围轻微着色。选取肝脏组织蜡块,行肝脏NF-KB-p65及IKBα抗体的免疫组化,可对SD大鼠肝脏局部炎症表现进行定性及定量。结果如下所示:显微镜下C组的NF-KB-p65抗体表达与B组相比局部可见细胞核染色更深、阳性面积更大,D组的NF-KB-p65抗体与C组相比局部可见细胞核染色较浅、阳性面积较小;C组的IKBα抗体表达与B组相比未见明显变化,D组的IKBα抗体与C组相比局部可见细胞核染色更深、阳性面积更大。我们采用Image J软件,通过该软件可以计算出呈阳性表达面积（Area）和总光密度值（IOD值）,最后我们通过运算IOD/Area可得到平均光密度值（AOD值）。我们可以通过各组AOD值的比较,明确各组NF-k Bp65抗体及IKBα抗体的表达数量,通过计算NF-KB-P65的平均光密度值（AOD1值）和IKBα的平均光密度值（AOD2值）的比值可比较三组之间的炎症反应情况。根据统计的结果分析可知:C组AOD1/AOD2的比值与B组相比明显增加（P＜0.05）,D组AOD1/AOD2的比值与C组相比明显降低（P＜0.05）。术后4周,B组0h、1h、2h的血糖较A组的未见明显变化（P＞0.05）,C组0h、1h、2h的血糖较B组的有升高趋势（P＞0.05）,D组的1h、2h血糖较C组的明显降低（P＜0.05）,D组0h血糖较C组的未见明显变化（P＞0.05）。通过各组SD大鼠OGTT图计算OGTT曲线下面积（AUC）,根据结果显示,B组AUC较A组未见明显变化（P＞0.05）,C组AUC较B组明显升高（P＜0.05）,D组AUC较C组明显降低（P＜0.05）。结论:通过大鼠胆管结扎,激活NF-KB炎症通路,肝脏出现纤维化改变;血糖升高,出现胰岛素抵抗。熊去氧胆酸干预4周后,发现NF-KB-p65表达下降,肝脏纤维化改善;血糖有所下降,胰岛素抵抗有所改善。
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