【摘 要】
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目的:运用免疫荧光技术对不同干预条件下的小鼠MIN6细胞表面特异性标志物PDX1、MafA、Oct4、Nanog的相对表达情况进行半定量分析,进而探讨Ang（1-7）和Wnt/β-catenin信号通路对胰岛β细胞去分化的作用及其两者之间的关系,为糖尿病的防治提供新的切入点。方法:1、将小鼠MIN6细胞加入事先准备好的3ml完全培养基,吹打均匀后置于培养瓶,37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育,24
【基金项目】
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山西省回国留学人员科研资助项目,血管紧张素（1-7）通过Wnt/β-catenin/FoxO1途径逆转高糖诱导的胰岛β细胞去分化（项目编号:2021-169）；
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目的:运用免疫荧光技术对不同干预条件下的小鼠MIN6细胞表面特异性标志物PDX1、MafA、Oct4、Nanog的相对表达情况进行半定量分析,进而探讨Ang（1-7）和Wnt/β-catenin信号通路对胰岛β细胞去分化的作用及其两者之间的关系,为糖尿病的防治提供新的切入点。方法:1、将小鼠MIN6细胞加入事先准备好的3ml完全培养基,吹打均匀后置于培养瓶,37℃、5%CO2细胞培养箱中孵育,24小时换液,若细胞生长状态良好,待均匀贴壁约80%时开始传代培养,选取第3-4代培育极好的细胞按详细的实验步骤执行操作。2、将细胞随机分为正常对照组、高糖组、高糖+Ang（1-7）组、高糖+CHIR99021组、高糖+Ang（1-7）+CHIR99021组、高糖+Ang（1-7）+A779组,统一培养条件下干预48小时。3、通过免疫荧光技术观察各组细胞特异性表面标志物PDX1、MafA、Oct4、Nanog的表达情况。结果:免疫荧光数据显示:与高糖组相比,单用Ang（1-7）干预,β细胞表面特异性成熟标志物PDX1、MafA表达明显增加,内分泌祖细胞标志物Oct4、Nanog表达明显减少;而加入Ang（1-7）受体拮抗剂A779后其效应明显减弱;单用CHIR99021干预,PDX1、MafA表达显著减少,Oct4、Nanog表达显著增多;而在CHIR99021和Ang（1-7）共同干预后,可部分减弱Wnt/β-catenin的作用,逆转上述因子的表达,改善胰岛β细胞去分化。结论:1、高糖可激活Wnt/β-catenin信号通路促进高糖诱导下的β细胞去分化;2、Ang（1-7）可抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有效减弱胰岛β细胞去分化。
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