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目的:研究间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对经鞘氨醇激酶1(sphigosine kinase 1,SphK1)基因沉默的人结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能机制。方法:采用来源于骨髓的间充质干细胞条件培养液(MSC-CM)和对照培养液(Control-CM)分别干预RKO细胞,分为RKO+MSC-CM组、RKO+Control-CM组,利用CCK8法检测细胞的增殖能力,Transwell试验检测细胞的迁移能力,Western blot法检测增殖标志物Ki-67、迁移标志物MMP-2和MMP-9、肿瘤干细胞标志物CD44和CD133的蛋白表达水平。采用慢病毒载体感染RKO细胞使其SphK1基因沉默,分为SphK1基因沉默组(SphK1(-)-RKO组)、阴性对照转染组(NC-RKO组),未转染的野生型细胞为空白对照组(wild-RKO组)。于光学显微镜和荧光显微镜下分别观察三组细胞的形态和绿色荧光颗粒携带情况,Western blot法检测三组细胞的SphK1蛋白表达情况,CCK8法和Transwell试验分别检测三组细胞的增殖和迁移能力。用MSC-CM和Control-CM分别干预SphK1(-)-RKO、NC-RKO细胞,分为SphK1(-)-RKO+MSC-CM组、SphK1(-)-RKO+Control-CM组、NC-RKO+MSC-CM组和NC-RKO+Control-CM组。检测方法同RKO+MSC-CM组、RKO+Control-CM组。观察MSC-CM对经SphK1基因沉默的RKO细胞增殖和迁移能力以及MMP-2、MMP-9、CD44和CD133蛋白表达量的影响。结果:CCK8结果显示,RKO+MSC-CM组细胞的增殖能力时间依赖性高于RKO+Control-CM组。Transwell迁移实验结果表明,RKO+MSC-CM组的迁移细胞显著多于RKO+Control-CM组[(477.00±18.36)vs(280.80±15.53),P<0.01]。说明MSC-CM能明显促进RKO细胞的增殖和迁移。Western blot检测结果表明,RKO+MSC-CM组Ki67、MMP-2、MMP-9、CD44和CD133蛋白表达量均高于RKO+Control-CM组[Ki67:(1.23±0.06)vs(0.95±0.07),MMP-2:(0.87±0.06)vs(0.67±0.04),MMP-9:(0.97±0.06)vs(0.82±0.06),CD44:(1.74±0.05)vs(1.36±0.06),CD133:(0.90±0.03)vs(0.75±0.06),均P<0.05或P<0.01]。说明MSC-CM可增加RKO细胞中上述肿瘤相关蛋白的表达水平。在光学显微镜下观察SphK1(-)-RKO、NC-RKO、wild-RKO组细胞未见明显差异,但在荧光显微镜下可见SphK1(-)-RKO组和NC-RKO组细胞携带绿色荧光颗粒,而wild-RKO组细胞无绿色荧光颗粒。Western blot结果显示,SphK1(-)-RKO组细胞SphK1蛋白表达水平较wild-RKO组和NC-RKO组明显下降[(0.56±0.05)vs(1.25±0.06)和(1.20±0.09),均P<0.01],表明成功构建了稳定转染SphK1低表达的RKO细胞。CCK8法检测结果显示,SphK1(-)-RKO组细胞的增殖能力较wild-RKO组和NC-RKO组明显下降。Transwell结果表明,SphK1(-)-RKO组细胞迁移数明显低于wild-RKO组和NC-RKO组[(92.20±18.96)vs(279.40±20.34)和(276.20±24.44),均P<0.01]。表明下调SphK1可抑制RKO细胞的增殖和迁移。CCK8法检测结果显示,NC-RKO+MSC-CM组细胞增殖能力明显较NC-RKO+Control-CM组细胞增强,而SphK1(-)-RKO+MSC-CM组和SphK1(-)-RKO+Control-CM组细胞增殖无明显差异。Transwell结果发现,NC-RKO+MSC-CM组迁移细胞数明显多于NC-RKO+Control-CM组[(473.20±19.06)vs(274.20±21.05),P<0.01]。而SphK1(-)-RKO+MSC-CM组迁移细胞数和SphK1(-)-RKO+Control-CM组没有显著差异[(94.20±14.15)vs(86.00±15.38),P>0.05]。表明抑制SphK1表达可逆转MSC-CM对RKO细胞的增殖和迁移的促进作用。Western blot检测结果显示,NC-RKO+MSC-CM组的肿瘤相关蛋白的表达较NC-RKO+Control-CM组显著增强[Ki67:(1.22±0.06)vs(0.94±0.07),MMP-2:(0.88±0.04)vs(0.68±0.05),MMP-9:(0.97±0.05)vs(0.79±0.04),CD44:(1.74±0.06)vs(1.36±0.06),CD133:(0.95±0.04)vs(0.73±0.07),均P<0.01]。而SphK1(-)-RKO+MSC-CM组与Sph K1(-)-RKO+Control-CM组无明显差异[Ki67:(0.68±0.04)vs(0.64±0.05),MMP-2:(0.57±0.04)vs(0.49±0.04),MMP-9:(0.61±0.05)vs(0.59±0.04),CD44:(0.88±0.04)vs(0.85±0.05),CD133:(0.60±0.05)vs(0.59±0.06),均P>0.05]。表明抑制SphK1可逆转MSC-CM对RKO细胞中Ki67、MMP-2、MMP-9、CD44和CD133蛋白的上调作用。结论:MSC可促进结肠癌RKO细胞的增殖和迁移,但对经Sph K1基因沉默的RKO细胞增殖和迁移无明显影响,且下调SphK1可以通过抑制MMP-2、MMP-9、CD44和CD133的表达逆转MSC对结肠癌RKO细胞增殖和迁移的促进作用。