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人巨细胞病毒(HCMV)是人类重要的病原体之一，孕妇初次感染HCMV，可导致胎儿畸形或流产，HCMV的活动性感染可以危及免疫抑制患者的生命。鉴于感染患者常常无症状或缺乏特异性症状，实验室检测技术具有极其重要的意义。 HCMV感染的检测方法包括病毒分离培养、抗原检测、核酸测定和血清学试验，上述方法各有优缺点。HCMV原发感染的诊断，主要采用血清学方法，HCMV-IgM型抗体是病毒抗原刺激机体最早出现的抗体，可作为活动性HCMV感染的一个重要指标。用于诊断HCMV-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)最为常用，具有操作简便、快速和设备要求低的特点，但来源于病毒的抗原存在着敏感性、特异性和标准化问题，基因重组获得表达产物的技术正引起各国学者重视，国内这方面的研究报道不多。 目前已知为数不多的几种HCMV蛋白具有免疫活性，其中gp52和pp150是抗原性较强的两种，能特异性识别IgM抗体。故而，本研究选择HCMV gp52和pp150的抗原性、特异性好的C端部分氨基酸的基因片段做目的基因，应用基因工程技术，得到了高效表达两者融合基因的工程菌，并对表达产物的抗原性进行了研究。研究包括两个部分：1．gp52基因在大肠杆菌中的诱导表达及重组蛋白的抗原性鉴定；2．pp150和gp52融合基因构建及其在原核细胞中的高效表达、表达产物的纯化与抗原性检测。 首先应用PCR技术扩增gp52蛋白IgM抗原决定簇编码区DNA片段，将其克隆到pGEM-T载体测序，核苷酸序列分析证实了其正确性。将克隆的gp52基因片段插入含有谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白pGEX-5X-3表达载体中，构建pGEX-gp52重组质粒，引入大肠杆菌表达，表达产物以可溶性融合蛋白和包涵体两种形式存在，上清液经GST亲和层析柱纯化后获得比较纯的融合蛋白，分子量约为41KDa，与预期分子量大小相一致。纯化后的融合蛋白经免疫印迹和ELISA分析具有良好的抗原性，能够与HCMV-IgM阳性血清呈特异性反应，载体蛋白的存在不影响表达抗原中文摘要的活性。本研究的第二部分用PCR方法扩增pp150的强抗原基因片段，pp150基因与已构建的pGEX一gp52重组载体经Ec解I和旅瓜厅I酶切后进行了定向连接，然后转化大肠杆菌，用PCR和质粒酶切筛选阳性克隆，对pGEX一pp150一gp52重组质粒的序列分析证明了pp150一gp52序列的正确性，融合基因在大肠杆菌中获得高效表达，用GST亲和层析柱纯化后的重组蛋白作为包被抗原，初步建立了间接 ELISA法。同时用pGEX一pp巧O一gp52融合蛋白、GST一gp52融合蛋白包被酶联板，检测45份血清标本，与国外EL工SA试剂盒的检测结果比较，具有非常显著的一致性，GST一pp150一gp52融合蛋白的敏感性和特异性分别为83.9%和85.7%;GST一即52融合蛋白的敏感性和特异性分别为74.1%和78.6%。 本研究实现了gp52基因与pp150基因的融合表达，获得了有免疫活性的表达产物，为进一步制备或组装高特异性和敏感性的HCMV基因工程抗原试剂盒奠定了基础。