目前研究发现PRRSV感染中存在抗体依赖性增强现象,亚中和剂量抗体能结合靶细胞表面Fc受体而增强病毒的感染。Fc受体主要有FcγRⅠ（CD64）、FcγRⅡ（CD32）、FcγRⅢ（CD16）和FcgRIV四个亚群,FcγRII（CD32）在人发现存在FcγRIIA,FcγRIIB和FcγRIIC三种亚型。FcγRIIB是抑制型受体,已在人、小鼠和牛上发现了两类主要的剪接异构体。本实验克隆并鉴定了猪FcγRIIB剪接异构体,为研究其介导PRRSV侵入细胞的机制奠定基础。根据GenBank中猪IgGIIB类Fc受体（swFcγRⅡB）（DQ026064）cDNA基因序列,利用Primer软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因,将扩增的基因片段插入到pTG19-T载体中,进行序列测定和分析。结果表明,克隆的swFcγRⅡB基因序列（FJ608551）长度为951bp,编码316个氨基酸,包括45个氨基酸的N-端信号肽序列,179个氨基酸的胞外区序列,23个氨基酸组成的疏水跨膜区序列, 69个氨基酸的胞质尾区序列;其胞外区有5个N-糖基化位点和4个半胱氨酸残基形成Ig样结构的2个二硫键;依据Ig保守结构,Cys71和Cys113形成第一个Ig样EC1结构域,Cys152和Cys196形成第二个Ig样EC2结构域。克隆序列与发表的swFcγRⅡB（DQ026064）的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.3%和98.3%,其胞质尾区多19个氨基酸的插入,与人类FcγRⅡb1剪接异构体相似。根据克隆的猪FcγRⅡB剪接异构体cDNA基因序列,利用Primer软件设计合成四对特异性引物,扩增信号肽加胞外区、胞外区、EC1结构域和EC2结构域的DNA片段,经kpn I和EcoR I双酶切后亚克隆到原核表达载体pET-32a中,分别构建了pET-ZY、pET-EY、pET-AY和pET-BY四种重组表达质粒,在IPTG诱导下成功表达swFcγRⅡb1-ZY、swFcγRⅡb1-EY、swFcγRⅡb1-AY、swFcγRⅡb1-BY四种融合蛋白,均以不溶性包涵体的形式存在。swFcγRⅡb1-ZY、swFcγRⅡb1-EY、swFcγRⅡb1-AY、swFcγRⅡb1-BY四种融合蛋白经纯化后分别免疫小鼠,制备抗融合蛋白抗体,经ELISA检测,效价分别为1:5120、1:5120、1:5120、1:10240。Western blotting检测表明,制备的多抗可以与各自的融合蛋白特异性结合,表明制备的多克隆抗体具有高度特异性。本试验将克隆的swFcγRⅡB剪接异构体cDNA基因亚克隆至pcDNA3.0真核表达载体中,构建了质粒pcDNA3-swFcγRⅡb1,利用脂质体瞬时转染COS-7细胞,经流式细胞术检测,发现swFcγRⅡB剪接异构体在COS-7细胞表面表达。同时转染细胞经G418筛选,4周后用间接免疫荧光检测,发现swFcγRⅡB剪接异构体能在COS-7细胞中稳定表达,表明建立了稳定表达swFcγRⅡB剪接异构体的COS-7细胞系。通过稳定表达COS-7细胞系的红细胞吸附试验,证明了swFcγRⅡB剪接异构体结合IgG免疫复合物的生物学活性。本试验研究结果将为进一步研究swFcγRⅡB剪接异构体功能作用及其介导的PRRSV侵入细胞的相互作用机制奠定基础。