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奶牛乳房炎是影响奶牛业发展的第一大疾病,遗传因素在乳房炎的发生中起着重要作用。寻找奶牛乳房炎抗性基因或者分子标记,从而进行标记辅助性选择,成为目前奶牛抗病育种研究热点。本研究选取了河北省唐山、保定、邢台、邯郸地区五个奶牛场共计300头荷斯坦奶牛作为试验材料,应用分子生物学实验技术对奶牛TLR4外显子3、FEZL基因和CXCR2基因进行了多态性分析,并采用最小二乘拟合一般线性模型分析候选基因与奶牛体细胞评分之间的关系及影响因素。利用PCR-RFLP技术对所研究奶牛群体TLR4基因exon3 Bbvl2I酶切位点进行了多态性筛查,结果显示在扩增片段91bp处存在一个C/T转换,导致编码的氨基酸由苏氨酸变成异亮氨酸。SAS统计结果表明:不同基因型对体细胞评分的最小二乘均值具有显著性差异(P＜0.05)。TT基因型个体体细胞评分最低为3.80,CC和CT基因型都为4.58,TT基因型个体对乳房炎抗病力较强。利用PCR-SSCP结合测序技术对所研究群体CXCR2基因进行了多态性筛查,结果发现扩增片断存在+612,+684,+777,+855,+858和+861六个SNPs位点。经连锁不平衡分析,6个位点都处于连锁不平衡状态,D’值都在0.85以上。+684与+861位点之间和+777与+858之间的相关程度高,r~2分别为0.635和0.541,相互代表的能力强。SAS软件统计结果表明:+684和+855位点不同基因型对奶牛体细胞评分的影响没有显著性差异(P＞0.05)。+612位点不同基因型对体细胞评分的影响具有显著性差异(P＜0.051,AA、AG和GG型个体的体细胞评分分别为4.43、4.75和4.55,AA型个体的体细胞评分最低,乳房炎抗性最强。+777位点,CG、GG两种基因型对体细胞评分的影响差异性显著(P＜0.05),CG型和GG型个体的体细胞评分分别为4.69和4.41,GG型个体对乳房炎的抗性较强。利用PCR产物直接非变性聚丙烯酰胺凝胶技术对所研究奶牛群体FEZL基因进行了多态性筛查,结果发现该研究群体中不存在GCC缺失突变位点。最小二乘分析结果表明牛场、胎次对奶牛体细胞评分影响差异显著。不同牛场奶牛体细胞评分的最小二乘均值差异性极显著(P＜0.01),第二牛场最高为5.08,第五牛场最低为3.37;胎次对体细胞评分的影响达到显著水平(P＜0.05),随着胎次的增加,奶牛体细胞评分升高;产犊季节对体细胞评分影响差异不显著(P＞0.05),春季和冬季产犊奶牛体细胞评分较低,夏季和秋季产犊奶牛的体细胞评分较高,患乳房炎的机率较大。牛场、胎次和产犊季节对奶牛产奶量影响的差异极显著(P＜0.01)。随着胎次增加,奶牛产奶量逐渐增加;夏季产犊产奶量最低,冬季产犊产奶量最高;不同体细胞数水平对奶牛产奶量没有显著影响(P＞0.05),但随着体细胞数的增加,产奶量下降。不同牛场、胎次和体细胞数的乳脂率最小二乘均值差异性极显著(P＜0.01),第三牛场为4.38%,显著高于其它三个牛场;随着胎次增加,乳脂率有下降的趋势,但第四胎出现波动;随着体细胞数增加,乳脂率升高;产犊季节对奶牛乳脂率没有显著性影响(P＞0.05)。不同牛场、产犊季节和体细胞数的乳蛋白率最小二乘均值差异性极显著(P＜0.01)。随着体细胞数增加,乳蛋白率升高。夏季和秋季产犊乳蛋白率较高,春季和冬季产犊较低。不同胎次乳蛋白率最小二乘均值没有显著性差异(P＞0.05)。