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脉络膜新生血管(choroidal neovascularization, CNV)是年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration, AMD)、病理性近视(pathological myopia)、中心性渗出性脉络膜视网膜炎(central exudative chorioretinopathy, CEC)、眼组织胞浆菌病(ocular histoplasmosis syndrome, OHS)、眼部肿瘤和外伤等眼部疾病致盲的重要原因[1]。CNV好发于黄斑区,常引起反复出血、渗出,继而导致瘢痕形成,严重影响中心视力。目前,CNV相关的疾病的研究是眼科学领域的重点与难点。新生血管形成的过程是多种促血管形成因子(angiogenic factors)和抑制血管形成因子(anti-angiogenic factors)共同调节的,正常情况下二者动态平衡。在正常血管形成的过程中,血管内皮细胞在多种因子的作用下增殖、迁移到靶组织逐渐形成有序成熟的血管网。而在病理过程中,抑制血管生成和促进血管生成的动态平衡被打破,血管形成失调且导致不成熟的血管形成。本研究探讨了几种血管生成相关基因在CNV形成过程中的作用,着重研究了基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1, SDF-1)及其受体趋化因子受体CXCR4和近年来发现的SDF-1的新受体CXCR7对脉络膜视网膜血管内皮细胞增殖、凋亡、迁移和管腔形成能力的影响,同时研究了血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)在缺氧条件下对脉络膜视网膜血管内皮细胞增殖和管腔形成的影响。第一部分：CXCR7/CXCR4/SDF-1轴对脉络膜新生血管作用的体外研究目的及背景：趋化因子受体CXCR4一度被认为是基质细胞衍生因子(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)唯一的受体,二者结合后在多种病理生理过程中发挥重要的作用。近年来发现了SDF-1的新受体——趋化因子受体CXCR7。本研究通过体外培养脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A),对CXCR7/CXCR4/SDF-1轴在脉络膜新生血管中的作用进行探索。方法：将RF/6A细胞置于含1%O2-94%N2-5%CO2缺氧培养箱中孵育,建立缺氧模型。将CXCR4-siRNA或／和CXCR7-siRNA通过脂质体2000转染入RF/6A细胞内。采用Real-time PCR法和Western blot法分别检测正常氧分压组、缺氧模型组、CXCR4-siRNA转染组、CXCR7-siRNA转染组、CXCR4-siRNA联合CXCR7-siRNA转染组中CXCR4以及CXCR7在mRNA和蛋白质水平的表达情况。分别采用CCK-8细胞增殖分析、Transwell迁移实验、Annexin V-FITC和碘化丙啶双染法、Matrigel管腔形成实验来检测各组细胞的增殖能力、迁移能力、凋亡情况和管腔形成能力。结果：在缺氧培养条件下,RF/6A细胞中CXCR4和CXCR7在mRNA和蛋白水平表达均上调,而特异性siRNA转染可下调CXCR4和CXCR7的表达。趋化因子受体CXCR4参与了SDF-1介导的RF/6A细胞的增殖和迁移,趋化因子受体CXCR7参与了RF/6A细胞的凋亡。CXCR4和CXCR7共同调节了RF/6A的管腔形成过程。结论：CXCR7/CXCR4/SDF-1轴参与了体外培养的RF/6A细胞的增殖、迁移、凋亡及管腔形成过程,其中CXCR4和CXCR7发挥不同的作用。第二部分：血管内皮生长因子对脉络膜视网膜血管内皮细胞增殖和管腔形成的作用及机制的研究目的及背景：血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是一种促血管形成因子,可以介导多种病理生理学作用。本研究探讨了VEGF对缺氧培养的脉络膜视网膜血管内皮细胞的作用及机制。方法：脉络膜血管内皮细胞(RF/6A)经MEK抑制剂(PD98059)和P13K抑制剂(LY294002)预处理后,置于含1%O2-5%CO2-94%N2的缺氧培养箱中孵育。用Real-time PCR和Western blot法分析正常氧分压培养组、缺氧培养组、通路抑制剂预处理组中VEGF在mRNA和蛋白质水平表达量的变化。采用CCK-8增殖实验、Matrigel管腔形成实验分析各组增殖能力和管腔形成能力。同时也检测ERKl/2通路和PI3K/Akt通路在其中的表达情况。结果：RF/6A细胞中VEGF,p-ERK和p-Akt可在缺氧环境中表达上调。PD98059和LY294000可下调VEGF的表达。VEGF促进RF/6A细胞的增殖和管腔形成,并且ERK1/2通路和PI3K/Akt通路参与其中。结论：VEGF调控RF/6A的增殖和管腔形成是通过ERK1/2和PI3K/Akt通路。