目的通过建立体外炎性环境,分组对比研究Wnt4重组蛋白在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,观察炎性状态下,成骨细胞在钛片上的黏附、伸展情况,探讨Wnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用以及对成骨细胞在钛表面黏附的影响,为临床上种植体周围炎治疗提供一种理论依据和实验数据。方法1、酶消法从小鼠颅顶骨中提取成骨细胞,结合差速贴壁法纯化细胞。通过形态学观察、生物学行为及成骨能力对其进行鉴定。2、通过CCK8法检测不同浓度LPS、Wnt4重组蛋白对小鼠成骨细胞增殖分化的影响,设计浓度梯度,根据检测结果及形态学观察确定所需的最适浓度,为后续实验提供依据。3、体外成骨诱导培养,按是否添加LPS、Wnt4重组蛋白分为四组:（1）对照组:成骨诱导液培养,（2）LPS组:成骨诱导液添加LPS（1μg/ml）培养,（3）Wnt4组:成骨诱导液添加Wnt4重组蛋白（0.05μg/ml）培养,（4）LPS+Wnt4组:成骨诱导液添加LPS（1μg/ml）、Wnt4重组蛋白（0.05μg/ml）培养。培养3、6、9天后,分别提取m RNA应用RT-PCR法检测BGLAP、Col I及Runx2的相对表达量;培养7天后比较碱性磷酸酶活性。培养21天后应用茜素红染色法比较细胞矿化能力。扫描电镜比较观察钛片表面成骨细胞黏附能力。结果1、通过酶消化法从小鼠颅骨成功提取出成骨细胞。细胞形态呈长梭型、纺锤型或不规则多边形,胞浆丰富,细胞核呈卵圆形,核仁明显。在体外行成骨诱导培养14天、21后,成骨细胞可分泌碱性磷酸酶并生成矿化结节及钙盐沉积。结果证明我们提取的细胞具有成骨分化的能力,为成骨细胞。2、细胞形态学观察及CCK8法检测不同浓度LPS及Wnt4重组蛋白对成骨细胞增殖的影响,结果显示在LPS刺激下各实验组CCK8数值均小于对照组,差异显著具有统计学意义（p﹤0.05）,且随着LPS浓度增强,抑制作用也随之增强。而在Wnt4重组蛋白刺激下,0.05μg/ml Wnt4重组蛋白组CCK8数值大于对照组,差异具有统计学意义（p﹤0.05）,对成骨细胞增殖呈促进作用。当Wnt4重组蛋白浓度大于0.1μg/ml时,CCK8数值小于对照组,对成骨细胞增殖呈抑制作用,并随着浓度增大抑制作用有增高的趋势,在2μg/ml Wnt4重组蛋白浓度下,成骨细胞几乎全部死亡。3、经过分组培养7天后,与LPS组相比,LPS+Wnt4组碱性磷酸酶活性明显升高（LPS组:166.23±32.52 LPS+Wnt4组:436.48±41.73）,差异具有统计学意义（p﹤0.05）。第21天的茜素红染色结果表明LPS+Wnt4组矿化能力高于LPS组且差异具有统计学意义（LPS组:5.23±2.41 LPS+Wnt4组:18.33±8.85,p﹤0.05）。4、分组培养3、6、9天后应用RT-PCR测定成骨相关基因（BGLAP、COL-I、Runx2）m RNA的表达量,其中Wnt4组中各基因相对表达量均高于其他组,第3、6天差异具有统计学意义（p﹤0.05）。LPS组各基因相对表达量均小于其他组且具有统计学意义（p﹤0.05）。COL-I目的基因相对表达量,Wnt4组均高于其他各组,且数据具有统计学意义（p﹤0.05）,在6、9天时LPS+Wnt4组基因表达量高于对照组。而LPS+Wnt4组、Wnt4组Rnux2目的基因三个时间段的表达量均高于其他组且具有统计学意义（p﹤0.05）。5、SEM观察显示,Wnt4组钛片上成骨细胞伸展形态好于其他各组,伪足数目及长度优于其他组。LPS组钛片上成骨细胞伸展最差且几乎没有伪足伸展。LPS+Wnt4组钛片上成骨细胞黏附形态与对照组相近。结论本实验通过提取小鼠原代成骨细胞,分组对比研究不同浓度的Wnt4在炎症状态下对成骨细胞分化及矿化能力的影响,揭示0.05μg/m LWnt4重组蛋白在炎症状态下调控成骨细胞分化的作用,为临床治疗种植体周围炎提供一种新的思路。