【摘 要】
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目的:探讨长链非编码RNA H19/miR-29b-3p/HMGB1信号通路对肺癌细胞生长的影响。方法:构建双荧光素酶确定LncRNA H19/miR-29b-3p/HMGB1的靶向关系,荧光定量PCR筛选合适的细胞进行研究。实验分为:1)对照组(Control);2)干扰空载组(sh-LncRNA H19 NC);3)LncRNA H19干扰组(sh-LncRNA H19)。qRT-PCR检测各
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目的:探讨长链非编码RNA H19/miR-29b-3p/HMGB1信号通路对肺癌细胞生长的影响。方法:构建双荧光素酶确定LncRNA H19/miR-29b-3p/HMGB1的靶向关系,荧光定量PCR筛选合适的细胞进行研究。实验分为:1)对照组(Control);2)干扰空载组(sh-LncRNA H19 NC);3)LncRNA H19干扰组(sh-LncRNA H19)。qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA H19的表达,筛选干扰效率较好的序列进行后续实验。CCK8检测细胞增殖能力,流式检测细胞凋亡与周期,划线检测细胞迁移能力,Transwell检测细胞侵袭能力,荧光定量PCR检测lncRNA H19、miR-29b-3p、HMGB1、TLR4和MMP9表达,各组HMGB1、TLR4和MMP9表达用Western blot检测。结果:1.IncRNA H19与miR-29b-3p具有靶向关系,miR-29b-3p与HMGB1也具有靶向关系。2.细胞系的选择:与正常细胞系2BS细胞相比,三种肺癌细胞系中,NCI-H1975细胞系LncRNA H19表达最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。因此后续研究选择NCI-H1975细胞系进行研究。3.干扰序列的筛选:与对照组相比,三条干扰序列的LncRNA H19表达都明显下降,但shLncRNAH19-2下降更明显些,差异具有统计学意义(P<0.05),因此后面的实验用这条干扰序列继续实验。4.CCK8检测NCI-H1975细胞系细胞增殖:sh-LncRNA H19组与对照组相比,LncRNAH19表达降低,细胞增殖能力减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。5.流式检测NCI-H1975细胞系细胞周期与凋亡:sh-LncRNA H19组与对照组相比,G1期细胞比例明显升高,S期明显下降,细胞凋亡明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.划线检测细胞迁移能力:sh-LncRNA H19组与对照组相比,24h和48h的细胞迁移率都明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。7.Transwell检测细胞侵袭能力:sh-LncRNA H19组与对照组相比,细胞侵袭明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。8.qRT-PCR和Western blot实验检测:sh-LncRNA H19组与对照组相比,lncRNA H19表达明显下降,miR-29b-3p表达明显升高,HMGB1、TLR4和MMP9表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.LncRNA H19/miR-29b-3p/HMGB1具有靶向关系;2.LncRNAH19/miR-29b-3p/HMGB1信号通路对肺癌的功能具有一定的影响,通过该通路从而介导肺癌细胞的增殖、侵袭和转移。
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