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第一部分在XCR1阳性乳腺癌中,ERa对XCL1的调节及作用机理目的：研究雌激素受体α(Estrogen receptor α, ERα)在XCR1阳性人乳腺癌细胞系中与趋化因子XCL1的关系及其机制。方法：用Kaplan Meier Plotter软件预测C族趋化因子配基1(XCL1,Ltn)及其受体XCR1对ERa阴性(ERα-)与ERα阳性(ERα+)乳腺癌患者无病生存期(DFS)的影响。采用Real-time PCR检测9种人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、 MDA-MB-468、MDA-MB-231HM、MDA-MB-231BO、MCF-7、T47D、BcaP-37、 ZR-75-30、SK-BR-3)和1种正常乳腺上皮细胞系(MCF-10A)中XCL1及其受体XCR1的基因表达水平；通过CCK8细胞增殖实验确定XCL1促进细胞生长的最适浓度,并且观察加入选择性雌激素受体下调剂氟维司群(ICI 182780)后对细胞生长的影响。ELISA筛选XCL1的最适作用时问。激光共聚焦显微镜技术分析共定位关系。免疫共沉淀实验分析XCL1的ERα的直接结合关系。结果：预测显示XCL1可延长ERα-乳腺癌患者的DFS,但对ERα+乳腺癌患者的DFS无影响,而XCRl无论对ERα-还是ERα+乳腺癌患者DFS均无影响。体外细胞实验结果表明,XCLl在乳腺癌细胞系MDA-MB-231HM和ZR-75-30中高表达,在正常乳腺上皮细胞及其它7种乳腺癌细胞系中低表达；XCR1在ERa+乳腺癌细胞系MCF-7、T47D、BCaP-37、ZR-75-30中高表达,而在ERα-乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-468中低表达,提示XCR1的表达可能与ERa状态相关。在乳腺癌患者手术切除的癌组织标本中,通过免疫组化方法进一步验证了XCR1与ERa的相关性。发现加入200 ng/ml重组人XCL1 (rhXCL1)可促进MCF-7细胞增殖,ICI 182780能逆转此作用,其机理可能与抑制MAPK信号通路有关,表现为加入rhXCL1后,总蛋白ERK和MEK无明显变化,而pERK和pMEK明显增加,但加入ICI 182780.后,pERK和pMEK表达下降。此外,XCL1与ERα具有共定位关系,但未能证明直接结合关系,提示二者之间可能存在间接结合蛋白。结论：在ERα阳性的人乳腺癌细胞系和乳腺癌患者手术切除的癌组织标本中,XCR1均呈高表达,其细胞内定位与ERα相一致,同时在一定浓度下重组XCL1在体外可活化MAPK信号转导通路并促进ERα阳性MCF-7细胞的生长,此作用可被选择性雌激素受体下调剂氟维司群所逆转,提示XCL1-XCR1生物学轴与雌激素受体之间存在串话,XCL1可能是雌激素受体下游的效应分子之一。此外,在肺高转移性人乳腺癌细胞系中XCL1呈高表达,表明XCL1可能参与肿瘤转移。第二部分XCRl过表达对乳腺癌细胞生长、侵袭、迁移和体内成瘤性的影响及作用机制目的：研究XCR1过表达对乳腺癌生长、侵袭、迁移和体内成瘤性的影响及相关的作用机制。方法：在XCR1低表达的MDA-MB-231细胞系(以下简称231)中,通过逆转录病毒感染构建XCR1的过表达细胞系MDA-MB-231/XCR1(以下简称231/XCR1)；采用CCK-8法、平板克隆实验、Transwell侵袭及转移实验分析XCR1过表达后细胞增殖、克隆形成、细胞迁移及侵袭性的改变,并用免疫荧光技术和Western blot法探讨其可能作用机理。取BALB/c裸小鼠每组6只,采用乳腺脂肪垫(mfp)注射法分别接种XCR1过表达及对照组细胞5×106/100μl,观察移植瘤大小及肺转移数目。最后通过Kaplan Meier Plotter软件预测XCR1在ERa+乳腺癌中对淋巴结转移患者DFS的影响。蛋白水平改变由Western blot进行分析。结果：Real-time PCR及RT-PCR、Western blot结果分别在mRNA表达和蛋白水平验证了XCR1过表达细胞系的成功建立。与对照组相比,XCR1过表达可抑制细胞增殖、克隆形成,但促进细胞迁移及侵袭,其差异具有统计学上的显著性意义(p<0.05)。进一步的机制研究显示XCRl抑制细胞增殖效应可能与降低MAPK和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路的激活相关,进而促进p-P53和自噬标志物LC3的产生来促进细胞凋亡。BALB/c裸小鼠移植瘤标本中免疫组化结果进一步证实p-P53和LC3的表达增加。同时,p-连环蛋白(β-catenin)的表达减少,从而促进XCR1介导的细胞迁移及侵袭。在动物实验中,XCR1过表达可降低移植瘤大小,与对照组移植瘤的差异均具有统计学上的显著性意义(p<0.01),且成瘤率也明显减低,只有50%。然而实验组与对照组相比均未出现肺转移情况,提示体内复杂的信号通路参与其作用。软件预测XCR1可降低ERa+乳腺癌淋巴结转移患者DFS,虽然没有统计学意义,但仍提示XCR1可能是ERα+乳腺癌患者淋巴结转移的不良预后因子。结论：基因修饰后过表达XCR1的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231在体外的生长受到抑制,在裸小鼠体内的成瘤性也降低,其机理可能涉及MAPK和PI3K/AKT/mTOR信号转导通路受抑而p-P53和LC3表达增加。然而,过表达XCR1的人乳腺癌细胞系231在体外的迁移及侵袭性显著增强,与p-连环蛋白下调有关。由此可见,XCR1可通过复杂的信号转导通路影响乳腺癌细胞的生物学特性。