犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）感染引起的犬的一种急性传染病，以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征，并可引起犬急性心肌炎。该病发病急，病程短，传染性强，死亡率高，是危害我国养犬业最为严重的传染病之一，可造成严重的经济损失。 根据GeneBank已发表的犬细小病毒VP₂基因序列，设计一对特异引物，采用SDS-蛋白酶K-酚氯仿抽提法，从犬细小病毒／犬瘟热二联苗中提取犬细小病毒的基因组DNA，并以此为模板进行PCR扩增，获得了犬细小病毒VP₂基因，将其克隆到质粒pET22b（+）的相应位点上。重组质粒经酶切鉴定和核苷酸序列分析，结果表明所插入的阅读框正确，序列无误，从而成功地构建了pET22b／VP₂原核表达载体。 将测序正确的重组质粒pET22b／VP₂分别转化E．coli BL21（DE3）和E．coli Rosetta^TM（DE3）两种不同宿主菌，IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳结果表明：重组质粒pET22b／VP₂在E．coli BL21（DE3）中未见明显的目的蛋白表达带；而在E．coli Rosetta^TM（DE3）中则获得了高效表达，在相应位置上（68kd处）可见明显的目的蛋白表达带；重组蛋白主要以包涵体的形式表达，且表达量占菌体总蛋白的30％以上；Ni²⁺亲和层柱纯化收集蛋白，纯化后的蛋白经复性处理后，能与犬细小病毒阳性血清发生特异反应。 本试验成功地克隆了犬细小病毒VP₂基因完整片段，并实现了其在原核表达系统中的高效表达，为犬细小病毒基因工程疫苗以及新型诊断试剂的研制奠定了基础。