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本研究对山羊子宫内膜基质细胞进行体外培养,探讨山羊子宫内膜基质细胞的分离与体外培养条件、生长特点及其增殖过程。试验采用不同的消化方法获取山羊子宫内膜基质细胞,通过原代培养、免疫组织化学鉴定、传代培养、生长曲线测定、细胞冻存等试验,观察山羊子宫内膜细胞在体外培养过程中的生长特性,并找出细胞传代最佳密度、冻存的最佳方法。结果表明:
1.在37℃条件下,采用2g/L的胶原酶I消化3~4h效果最好,细胞悬液粘稠度小,腺团较大,腺团与单个细胞易分离。经200目滤网过滤-低速离心-沉淀三个步骤分离悬液中的单个细胞,得到的细胞量大,而且纯净。
2.细胞在培养0.5h左右开始贴壁,在培养过程中逐渐呈现多角形和纺锤形,细胞核呈卵圆形,3-4d即铺成单层,细胞间存在重叠生长现象;利用免疫组织化学染色法做鉴定,2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95%以上,不表达角蛋白,证明所得到的细胞为子宫内膜基质细胞。
3.传代子宫内膜基质细胞以1×105/mL的密度接种,约有2d的潜伏期,在第8d时尚未到达平台期,以5×105/mL的密度接种,在第6d时到达平台期。以5×104/mL、1×104/mL的密度接种,细胞不能生长。传代子宫内膜铺成单层后,呈明显的条纹状纹路,经3次传代后,消化下来的细胞体积增大。
4.在液氮中冻存时,含10%的DMSO较有利于细胞的存活,血清含量在20%~90%之间对于子宫内膜基质细胞的冻存效果影响不大。