【摘 要】
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以能量代谢障碍性疾病为主的酮病和脂肪肝是规模化牧场奶牛常见的一类高发的群发病,给奶牛养殖业带来严重经济损失,该类疾病的高效防控产品的研发已成为领域研究热点。本试验旨在研发一种以杨梅素为功能性成分的保健颗粒,通过评价其对奶牛能量代谢障碍性疾病的防控效果,阐释杨梅素调控高脂肪酸介导的犊牛肝细胞脂质损伤机制,为疾病防控提供新产品和技术支持。本试验按比例将棕榈油、玉米油、杨梅素、植物甾醇、大豆异黄酮等材料
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以能量代谢障碍性疾病为主的酮病和脂肪肝是规模化牧场奶牛常见的一类高发的群发病,给奶牛养殖业带来严重经济损失,该类疾病的高效防控产品的研发已成为领域研究热点。本试验旨在研发一种以杨梅素为功能性成分的保健颗粒,通过评价其对奶牛能量代谢障碍性疾病的防控效果,阐释杨梅素调控高脂肪酸介导的犊牛肝细胞脂质损伤机制,为疾病防控提供新产品和技术支持。本试验按比例将棕榈油、玉米油、杨梅素、植物甾醇、大豆异黄酮等材料混合制备一种产后保健颗粒。于黑龙江省某规模化牧场随机选取围产期奶牛18头,对照组和试验组各9头,对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的同时添加制备的保健颗粒（40 g/天/头）,于分娩当天连续饲喂7 d,所有试验奶牛分别在产前21 d、14 d、7 d、产后0 d、3 d、7 d、14 d、21 d采集血液、尿液及产后乳汁,检测血液、尿液及乳汁中的相关代谢指标,以评价杨梅素混合颗粒对奶牛能量代谢障碍性疾病的防控效果。同时,为了探究杨梅素混合颗粒的功能性成分杨梅素对肝细胞脂质代谢的影响,本实验在分离的犊牛原代肝细胞中添加1.2 m M脂肪酸（Fatty acids,FAs）构建原代犊牛肝细胞肝脂沉积模型,分别添加25、50、100μM的杨梅素配制液,通过检测肝细胞甘油三酯水平、脂滴含量及氧化和抗氧化指标,利用Western Blotting和q RT-PCR检测脂质代谢、内质网应激水平和炎症因子,以探究杨梅素对高脂肪酸介导的犊牛肝细胞脂质损伤的调控机制。体内研究结果显示:试验组奶牛酮病的发病率比对照组降低了33%,患脂肪肝的风险降低22%,经济损失分别降低80.6、120.9元/头。与对照组相比,试验组奶牛产前血液生化指标均无显著差异;在产后3 d、7 d、14 d、21 d试验组AST、AST/ALT、TBIL、GGT、LDH、GLO、NEFA和BHBA水平显著或极显著低于对照组（P＜0.05）,而A/G和GLU水平有显著的升高（P＜0.05）。乳汁指标中,试验组的日产奶量在产后0～9 d低于对照组,但在产后10～21 d均有所升高;试验组奶牛产后21 d乳脂显著降低于对照组（P＜0.05）;产后21 d乳糖显著高于对照组。检测尿分成结果中,试验组KET、WBC和VC水平在产后显著降低;而尿液p H在产后14 d显著升高（P＜0.05）。另外,试验组血液MDA在产后均显著低于对照组（P＜0.05）;而SOD和GSH产后均有不同程度的升高（P＜0.05）。以上表明,本试验制备的产后保健颗粒能够显著缓解肝损伤,提高抗氧化能力和泌乳性能,最终降低奶牛能量代谢病的发病率,减轻牧场的经济损失。体外试验结果显示:添加1.2 m M的FAs上调了肝细胞脂质合成基因FASN、ACC1、SREBF1和DGAT1的表达,并显著升高了TAG及脂滴含量（P＜0.05）;内质网应激相关蛋白GRP78、PERK和炎症通路NF-κB、TNF-α的表达以及氧化应激指标MDA和H2O2显著升高（P＜0.05）。添加产后保健颗粒主要成分（25、50、100μM）的杨梅素后,与添加1.2 m M FAs组相比,添加50或100μM的杨梅素均极显著降低了TAG和脂滴含量（P＜0.01）,同时降低了脂质合成相关基因SREBF1、FASN的表达;下调了MDA和H2O2氧化应激指标及内质网应激相关蛋白PERK、GRP78和炎症通路NF-κB、TNF-α的表达（P＜0.05）;此外,研究结果显示添加50μM或100μM的杨梅素与添加抗氧化剂NAC对高脂肪酸诱导的肝细胞脂质损伤特征一致,这表明杨梅素可能通过抗氧化作用缓解了高浓度脂肪酸诱导的肝细胞氧化损伤和内质网应激途径,下调了炎症通路NF-κB的表达,进而减轻了肝细胞脂肪的生成和积累。综上所述,本试验制备的杨梅素混合颗粒能显著缓解肝损伤,可在一定程度上减少围产期奶牛能量代谢障碍性疾病的发生。其功能性成分杨梅素通过抗氧化作用下调了内质网应激和炎症通路的表达,缓解了肝脏脂质的蓄积。为规模化牧场的产后保健措施提供了理论依据,对脂肪肝和相关代谢紊乱疾病具有潜在的保健功能作用。
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