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本文对赖氨酰谷氨酸二肽(Vilon)的制备及其抗肿瘤活性和抗肿瘤多肽ND100及其单克隆抗体的制备进行了研究。
1.赖氨酰谷氨酸二肽(Vilon)的制备及其抗肿瘤活性研究。用液相法人工合成了抗肿瘤二肽Lys—Glu(Vilon),分子量为275.3。用细胞计数法和MTT法测定Vilon对人肠癌LOVO,人胃癌MKN45和人肝癌QGY7703三种肿瘤细胞生长的抑制作用,以及对人体正常细胞生长的影响;并对其进行了体内实验。Vilon对体外培养的LOVO,MKN45和QGY7703细胞具有剂量依赖性抑制作用,但对人正常白细胞无明显抑制作用。体内抑瘤实验表明,Vilon对小鼠肝癌H22的生长有抑制作用,有效剂量为15mg·Kg-1,当使用高剂量30mg·Kg-1时,对小鼠移植性肿瘤肝癌H22的抑瘤率达60%以上,且具有剂效关系。Vilon具有明显的体外、体内抗肿瘤活性。
2.抗肿瘤多肽ND100及其单克隆抗体的制备。用液相法人工合成了ND100,并用HPLC和质谱对其进行纯化鉴定,ND100的纯度达98%以上,分子量为846.9。将ND100与BSA偶联,用ND100-BSA免疫小鼠,再腹腔注射加强免疫。取其脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞经PEG促融剂杂交融合得杂交瘤细胞。没有融合的脾细胞和SP2/0细胞在HAT培养基中死亡。筛选分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,并将其进行克隆化培养。获得分泌抗ND100单克隆抗体的五个阳性克隆。