论文部分内容阅读
蛋白质磷酸化在所有的真核细胞中是一种非常重要的翻译后修饰,调节着细胞分裂、生长、迁移、分化和细胞间信号传导等活动。鉴于磷酸化在细胞中所扮演的中心调控角色,因此,关于蛋白质磷酸化修饰的研究以及对磷酸化蛋白质的检测和磷酸化位点的确认成为功能蛋白质组学里一项重要的研究内容。目前,在分析磷酸肽结构方面质谱技术是第一选择,然而,由于许多磷酸化肽段的相对含量很低,磷酸肽的离子化效率差,又有大量的非磷酸肽对磷酸肽的信号有抑制作用,这些原因导致用质谱对磷酸肽进行直接分析具有很大困难。因此,在进行质谱分析之前对复杂样品中的目标蛋白或肽段进行选择性富集以此来增加磷酸肽的相对含量,增加质谱对磷酸肽的检测效率并能提供确切的磷酸化位点信息,所以关于磷酸肽的富集技术的研究在目前看来既是热点也是难点。本论文以钛酸丁酯(TBT)和羧基化多壁碳纳米管(MWNTs-COOH)为材料通过水热法合成得到用于富集磷酸肽的TiO2-MWNTs纳米复合材料,材料的成分和结构特性用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、傅立叶红外光谱仪(FTIR)和X射线衍射(XRD)进行表征,证明了TiO2晶体纳米颗粒与MWNTs之间是以共价酯键连接,材料中TiO2晶型以锐钛矿相为主,粒径大约10nm,材料并没有出现团聚等现象。以标准磷酸化蛋白P-casein对材料的富集效果进行评价。实验中对上样条件进行优化,上样溶液中酶解肽段含量为4×10-12mol/L,上样溶液中乙腈浓度为60%,三氟乙酸浓度为0.1%,添加0.5mol/L的NaCl调整溶液离子强度,选择300mg/mL的乳酸作为非磷酸肽抑制剂,0.4mol/L的氨水洗脱,结果表明此方法具有较高的选择性。利用β-casein与BSA的摩尔比分别为1：50和1：100酶切肽段进一步考察富集材料对磷酸肽的富集选择性,质谱图显示材料对磷酸肽有很好的富集效果。此材料进一步在酶解后的脱脂牛奶中成功富集到磷酸肽。