【摘 要】
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目的运用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)联合串联基质辅助激光解吸飞行质谱仪(MALDI-TOF/TOF MS)筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者抗线粒体抗体(AMA)阳性与阴性间血清标志物,并
【出 处】
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北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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目的运用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)联合串联基质辅助激光解吸飞行质谱仪(MALDI-TOF/TOF MS)筛选原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者抗线粒体抗体(AMA)阳性与阴性间血清标志物,并探讨其在PBC中的临床意义。方法收集符合AASLD标准的PBC患者30例。其中AMA+患者20例,AMA-(间接免疫荧光法测AMA及酶联免疫吸附法测AMA-M2均为阴性)患者10例。首先使用DIGE技术对筛选组(4对性别、年龄和病理分期匹配的AMA+和AMA-PBC患者)进行血清差异表达蛋白质点分析,而后使用MALDI-TOF/TOF MS对这些蛋白质进行进一步的鉴定。最后使用Western blot法在所有样本中对鉴定得到的血清淀粉样蛋白P(SAP)和玻连蛋白(VN)进行表达水平验证。结果在PBC患者中分离获得1840个蛋白质点。结果经生物信息学分析后发现,AMA+与AMA-PBC患者组间差异倍数>1.5或<-1.5以上的点共有28个差异点(P<0.05)。其中,AMA+组患者较阴性组表达上调的蛋白质点共9个,而相对表达下调的蛋白质点共19个。经进一步鉴定最终得到9个蛋白质,SAP、血清淀粉样蛋白A、血小板碱性蛋白、维生素D结合蛋白-3、VN、α1微球蛋白、间α球蛋白抑制因子、载指蛋白A-IV和补体H相关蛋白2。Western blot验证结果显示,AMAPBC患者其VN表达水平高于AMA阳性患者(P<0.01),而SAP在两者间的表达量无统计学差异(P=0.175)。结论本研究首次使用蛋白质组学技术探寻AMA+与AMA-PBC患者之间的血清标志物,研究结果表明DIGE联合MALDI-TOF/TOF MS是筛选此类血清标志物的可靠技术。VN在AMA-PBC患者中明显升高,可能是此类患者胆管损伤较AMA+患者更为严重的原因之一,仍需在临床大样本,尤其是在AMA-PBC患者中进行验证,同时分析该标志物与各种生化及免疫指标的相关性,确定其临床意义。
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