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[目的]初步研究Id1蛋白在侵袭性垂体腺瘤组织中的表达及意义,构建代号为NQ-04的原代侵袭性垂体腺瘤细胞株,探讨siRNA转染后NQ-04细胞侵袭性的改变,从而为临床诊断和治疗侵袭性垂体腺瘤提供新的理论和实验依据。[方法]1. Western blot分别检测Id1蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达我们从本院收集的45例术中新鲜冰冻垂体腺瘤中随机选取15例侵袭性垂体瘤和15例非侵袭性垂体瘤提取全蛋白,提取的总蛋白,加入2xSDS蛋白上样缓冲液(按1：1比例),于100℃煮沸5min。Westernblot方法检测后观察凝胶图像,应用AdobePhotoshop图像软件扫描Western blot凝胶图片,得到相应灰度值,分析Idl蛋白在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤中的表达是否有显著差异。2.构建代号为NQ-04的原代侵袭性垂体腺瘤细胞株术中取出垂体腺瘤组织后,在无菌条件下放入PBS溶液中,封口膜封口,置于冰桶中转移至实验室。通过机械消化和酶消化结合方法分离细胞。本课题组利用侵性垂体腺瘤新鲜组织样本原代培养成代号为NQ-04的细胞。3. siRNA-Idl转染NQ-04细胞siRNA用无RNA酶H20稀释成20umol/L,分装储存于-20℃。转染时用细胞培养液稀释,按照2.5：1比例和lipotaminelTM2000混匀,室温静置20min,然后按照不同终浓度加入不含血清的培养液中,继续培养6h后换成含10%血清的培养液继续培养24-72h。4.Western blot检测siRNA-Id1转染后NQ-04细胞中的Id1蛋白表达,检验Id1基因沉默效率。5.移行小室(Transwell)侵袭实验检测siRNA转染NQ-04细胞后对其侵袭能力的影响,200倍光镜下随机取5个视野计数膜背面的穿膜细胞,取平均数。实验重复3次。[结果]1.Id1基因在侵袭性垂体瘤中的表达明显高于在非侵袭性垂体瘤中的表达,差异有统计学意义(n=15,t=2.725,p=0.013,p<0.05),也同样进一步提示Id1基因在侵袭性垂体瘤中具有调节作用。2.Id1蛋白在siRNA-idl转染后的NQ-04细胞中表达显著减低。3.在200倍随机选取的5个视野下计数对照组与干扰组细胞数发现被siRNA-id1转染的NQ-04细胞组为(40±16.54),未被siRNA-id1转染的NQ-04细胞组为(67±17.45),差异有统计学意义(t=2.972,p=0.016,p<0.05)。表明转染siRNA靶向干扰Idl后,NQ-04细胞的迁移能力明显降低。Id1蛋白在siRNA-id1转染后的NQ-04细胞中表达显著减低。[结论]1.Id1蛋白在侵袭性垂体腺瘤中表达上调,与非侵袭性垂体腺瘤相比具有显著性差异,有统计学意义。2.Id1蛋白可促进垂体腺瘤细胞的侵袭、迁移等生物学行为,Id1基因靶向治疗可能成为治疗侵袭性垂体腺瘤的新的策略之一。