受精是哺乳动物生命的起源,它包括精卵识别、融合、合子形成等重要过程。最近两年随着生物技术的高速发展,人们对于受精过程有了一定的了解,大量的蛋白被证实参与了整个受精过程,但受精过程的具体分子机制仍不完全清楚。CRISP1是一种重要的受精蛋白,在雌性、雄性小鼠的生殖系统中均发现了该蛋白的表达,有研究称该蛋白可能参与了精子的获能、精卵融合等过程。但目前CRISP1蛋白在猪上,尚没有相关报道。本试验原核表达了猪CRISP1蛋白,制备了鼠抗猪CRISP1多克隆抗体,用免疫荧光检测了CRISP1蛋白在生殖细胞中的表达情况;设计体外受精添加抗体的实验,以确定该蛋白是否参与了精卵识别、融合等受精过程。本实验选用较常见的载体PET-32a为原核表达载体,抽提成年公猪的睾丸组织RNA,通过RT-PCR的办法克隆了猪CRISP1的c DNA序列,成功构建原核表达载体PET-CRISP1,转化大肠杆菌Rosetta,经诱导表达最终得到了HIS-CRISP1原核表达蛋白。本实验运用切胶纯化蛋白的方法得到了纯化的HIS-CRISP1原核表达蛋白。最后用纯化的HIS-CRISP1原核表达蛋白免疫成年昆明雌性小鼠,向小鼠腹腔注射S180细胞后,最终获到腹水CRISP1多克隆抗体。分别以猪的心脏、睾丸、附睾组织全蛋白为抗原,制备的腹水多克隆抗体为抗体,经Western检测验证,证明抗体制备正确。本实验通过免疫荧光证明CRISP1蛋白不仅在猪的睾丸支持细胞、精子上表达,且在猪的卵细胞及卵丘颗粒细胞上也表达。此外,本实验还分别对获能前及获能后的猪精子进行了免疫荧光检测,发现获能前,CRISP1主要大量聚集在头尾结合部;而在精子获能后,该蛋白大量聚集在精子头部赤道板位置。体外受精实验中,我们在受精液中分别添加了多克隆抗体(实验组)和参照腹水(参照组),两组的受精率及分裂率差异均不显著,但有降低的趋势,暗示CRISP1蛋白很可能参与后续的精卵识别、融合等生殖生理过程。