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在体液免疫中,表面抗原分化簇4（Cluster of differentiation 4,CD4）分子作为T细胞受体（T cell receptor,TCR）的共受体,与主要组织相容性复合物Ⅱ（Major histocompatibility complex Ⅱ,MHC Ⅱ）以及淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（Lymphocyte specific protein tyrosine kinase,LCK）结合,在 T 细胞活化过程中发挥重要作用。成熟的CD4+T细胞从胸腺向外周迁移,其通过表面的T细胞受体识别由抗原呈递细胞（Antigen-presenting cells,APC）表面的MHC Ⅱ类分子递呈的抗原。受到抗原刺激后,CD4+T细胞被激活会分泌白细胞介素4（Interleukin-4,IL-4）,在IL-4作用下,CD4+T细胞进一步分化为辅助型T细胞2（T helper2 cell,Th2）,Th2辅助B细胞分化为效应B细胞,促进抗体分泌。CD4分子和IL-4在体液免疫中具有重要作用,但目前有关牛的CD4和IL-4相关试剂较少,制备相应的单克隆抗体（Monoclonal antibody,McAb）为进一步深入研究牛的免疫应答提供了材料支撑。1.牛CD4单克隆抗体的制备与鉴定（1）分离荷斯坦奶牛外周血单核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）提取总RNA并反转录成cDNA,以cDNA为模板扩增牛CD4（BoCD4）基因,构建原核重组菌 BL21（DE3）（pCold-BoCD4）和 BL21（pGEX-6P-1-BoCD4）,成功纯化出rHis-BoCD4 和 rGST-BoCD4,大小分别为 53 kDa 和 72 kDa。（2）将 rHis-BoCD4 对BALB/c雌鼠3次免疫后细胞融合,以rGST-BoCD4为检测原建立间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞培养上清,筛选到6株分泌BoCD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5G10、1F11、3F9、4G10、3E2和1H4。（3）经亚类鉴定,筛选到的所有BoCD4单抗亚类均为IgM型。（4）采用间接ELISA对单抗腹水进行效价测定,1H4腹水效价达到5×106。（5）Western blot结果显示所有单抗均与rHis-BoCD4和rGST-BoCD4反应并出现特异性条带。（6）间接免疫荧光试验显示5G10、1H4和1F11可与转染真核质粒pCMV-HA-BoCD4的HEK293T细胞特异性反应。2.牛IL-4单克隆抗体的制备与鉴定（1）以重组质粒pSP73-BoIL-4为模板扩增牛IL-4（BoIL-4）,成功构建真核重组质粒pCMV-HA-BoIL-4。复苏本室前期构建的重组菌BL21（DE3）（pET-30a-BoIL-4）和BL21（pGEX-6P-1-BoIL-4）,成功纯化出 rHis-BoIL-4 和 rGST-BoIL-4,大小分别为 19 kDa和39kDa。（2）以rHis-BoIL-4作为免疫原免疫小鼠,rGST-BoIL-4作为检测原建立间接ELISA方法,筛选到3株分泌BoIL-4单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为2B3、3C5和4D7。（3）经亚类鉴定,2B3和3C5单抗亚类为IgG1型,4D7单抗亚类为IgM型。（4）对单抗腹水效价测定,2B3腹水效价达到1.6×108。（5）Western blot结果显示所有单抗均与rHis-BoIL-4和rGST-BoIL-4反应并出现特异性条带。（6）间接免疫荧光试验显示2B3和3C5可与转染真核质粒pCMV-HA-BoIL-4的HEK293T细胞发生特异性反应。筛选到的单抗具有良好的特异性,这为BoCD4和BoIL-4的在牛上的进一步研究提供生物材料,为深入研究BoCD4和BoIL-4提供了重要生物试剂。