【摘 要】
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目的:中药复方是中医用药的主要形式,方剂的灵魂是配伍。用现代科学方法和手段阐明配伍规律、作用机理,有助于揭示中医药理论的科学内涵,是中医药现代化研究的重要内容。本文以具有回阳、益气、固脱之功效的传统复方参附汤为研究对象,建立冠状动脉结扎和阿霉素诱导的心力衰竭大鼠模型,分析参附汤配伍前后对心力衰竭的治疗作用;采用网络药理学方法探究参附汤“多成分-多基因-多靶点”治疗疾病的配伍作用机制;从药代动力学角
【基金项目】
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上海市自然科学基金面上项目（编号:18ZR1430200）；
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目的:中药复方是中医用药的主要形式,方剂的灵魂是配伍。用现代科学方法和手段阐明配伍规律、作用机理,有助于揭示中医药理论的科学内涵,是中医药现代化研究的重要内容。本文以具有回阳、益气、固脱之功效的传统复方参附汤为研究对象,建立冠状动脉结扎和阿霉素诱导的心力衰竭大鼠模型,分析参附汤配伍前后对心力衰竭的治疗作用;采用网络药理学方法探究参附汤“多成分-多基因-多靶点”治疗疾病的配伍作用机制;从药代动力学角度,研究人参皂苷Rg1与附子中3类生物碱配伍前后,附子生物碱在大鼠血浆中的药代动力学差异;初步阐释人参、附子两者配伍的科学性和合理性,为临床合理用药提供依据。方法:1.取健康SD大鼠分别采用冠状动脉结扎法、阿霉素诱导法建立两种心力衰竭模型。采用小动物超声心动图评价各组大鼠心功能;取心脏组织进行HE和Masson染色,观察各组大鼠心脏组织病理变化;采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中ACE、REN、ALD、ANP的含量,探究参附汤配伍前后对心衰大鼠的保护作用。2.通过TCMSP数据库检索参附汤化学成分,根据OB≥30%,DL≥0.18,以及文献报道,筛选主要活性成分。采用Swiss Target Prediction数据库收集成分靶点;运用Drug Bank、TTD、Genecards数据库检索与心衰相关靶点;借助Cytoscape软件构建“成分-靶点”网络图;利用DAVID线上工具进行GO和KEGG富集分析,探讨人参-附子配伍的内在机制;使用Discovery studio软件进行高通量分子对接,以及SPR技术验证化合物与目标蛋白之间的亲和力。3.建立大鼠血浆中乌头碱、苯甲酰乌头原碱和乌头原碱的UPLC-MS/MS定量分析方法。研究人参皂苷Rg1对三个生物碱在大鼠体内的药动学影响。结果:1.两种心衰模型中,模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVEDV和LVESV值均显著增加（P＜0.01或P＜0.001）,EF和FS值均显著降低（P＜0.01或P＜0.001）,血清中ACE、REN、ALD、ANP含量均显著升高（P＜0.01或P＜0.001）;且模型鼠心肌细胞紊乱,变性,坏死灶明显,心肌纤维染色不均,间质胶原纤维大量沉积。药物干预后,附子组和参附汤组大鼠心肌细胞明显改善,间质纤维化程度明显减轻,心功能和血清ACE、REN、ALD、ANP含量均不同程度改善。两种模型中,附子和参附汤对阿霉素诱导的心力衰竭作用效果较好。2.筛选出41个活性成分,其中人参21个、附子20个,预测到成分靶点739个;通过Drugbank、TTD、Genecards筛选出14530个与心衰相关疾病靶点,韦恩图显示64个共同成分-疾病靶点,其中46个是附子作用靶点,54个是人参作用靶点;人参-附子配伍之后,可通过协同增效发挥治疗心力衰竭作用,其相关信号通路增多,通路上的蛋白靶点增多,核心蛋白的度值增加,生物功能活性也相应增加;分子对接和SPR技术可用于验证网络药理学研究结果。3.人参皂苷Rg1与苯甲酰乌头原碱配伍后,苯甲酰乌头原碱的Cmax和AUC（0-t）显著增加（P＜0.01或P＜0.05）,CL/F显著降低（P＜0.05）;人参皂苷Rg1与乌头碱合用后,乌头碱的Cmax、AUC（0-t）和t1/2显著降低（P＜0.05）,CL/F增加（P＜0.01）;而人参皂苷Rg1和乌头原碱联合给药后,乌头原碱的t1/2,Cmax和AUC（0-t）基本不变。结论:参附汤配伍之后治疗心衰的作用增强,通过增加心衰大鼠射血分数、短轴缩短率以及降低大鼠血清ACE、REN、ALD、ANP的水平来改善心衰大鼠症状和心功能。结合网络药理学,得出成分与靶点之间存在着复杂的网络关系,人参-附子配伍之后,可通过协同增效发挥治疗心力衰竭作用,其相关信号通路增多,通路上的蛋白靶点增多,生物功能活性增加,更好的发挥治疗心血管疾病的作用,这从整体角度诠释了参附汤配伍作用机制。人参皂苷Rg1分别与乌头碱、苯甲酰乌头原碱、乌头原碱配伍后,人参皂苷Rg1能增强苯甲酰乌头原碱的吸收,促进乌头碱的代谢,但对乌头原碱的吸收影响不显著。研究工作初步阐释了人参、附子两者配伍的科学性和合理性,为临床合理用药提供依据。
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