【摘 要】
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目的:本研究从补骨脂二氢黄酮甲醚衍生物中筛选具有BRD4蛋白抑制作用的化合物。探究其在抗动脉粥样硬化部分和抗肿瘤部分的药效作用。方法:利用TR-FRET法筛选出BRD4抑制剂;在抗动脉粥样硬化方面:利用q PCR和Western blot研究化合物对肝癌细胞内和媒介中载脂蛋白A1基因和蛋白表达的影响,并利用计算机模拟法分析化合物D9、D66与BRD4蛋白结合模式;利用LDLR-/-小鼠构建动脉粥样
【基金项目】
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国家自然科学基金,天然PPARs三重激动剂Bavachinin的结构优化与构效关系研究,基金号81872763；
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目的:本研究从补骨脂二氢黄酮甲醚衍生物中筛选具有BRD4蛋白抑制作用的化合物。探究其在抗动脉粥样硬化部分和抗肿瘤部分的药效作用。方法:利用TR-FRET法筛选出BRD4抑制剂;在抗动脉粥样硬化方面:利用q PCR和Western blot研究化合物对肝癌细胞内和媒介中载脂蛋白A1基因和蛋白表达的影响,并利用计算机模拟法分析化合物D9、D66与BRD4蛋白结合模式;利用LDLR-/-小鼠构建动脉粥样硬化模型,评价D9、D66对该小鼠血脂四项（总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白）、主动脉弓以及主动脉瓣脂质堆积的作用。在抗肿瘤方面:利用MTT法研究化合物对体外培养的人肿瘤细胞增殖的影响,来筛选细胞瘤株模型;通过MTT法,平板克隆法观察化合物D36对人非小细胞性肺癌细胞增殖的影响;采用流式细胞分析技术分析D36对人非小细胞性肺癌细胞周期的影响,并进一步通过Western blot法对周期相关蛋白进行分析;通过流式细胞分析技术和TUNEL法研究D36对人非小细胞性肺癌细胞凋亡的影响,并利用Western blot法研究相关蛋白表达情况及探索其相关机制;为了研究D36是否为BRD4的抑制剂,通过计算机模拟法观察化合物与BRD4蛋白的结合情况并联合体外对BRD4蛋白的敲减实验（si RNA）和过表达实验进行综合判定;通过体内裸鼠荷瘤实验,研究D36对A549人非小细胞性肺癌细胞在体内的生长情况的影响。结果:首先筛选出8个具有BRD4抑制作用的化合物;在抗动脉粥样硬化方面,化合物D9、D66能够从基因水平和蛋白水平上提高载脂蛋白A1的表达,并能提高上清液和细胞中的载脂蛋白A1的表达,提高细胞中ABCG1蛋白的表达,进而提高高密度脂蛋白的表达;通过LDLR-/-小鼠体内实验进行药效学验证,研究表明D9、D66能够降低总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白,提高高密度脂蛋白水平,能一定程度改善主动脉弓脂质堆积,但对主动脉瓣脂质堆积无明显改善;在抗肿瘤方面,D36可以抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,阻滞G2/M期。蛋白结果表明,D36通过CDC25C/CDC2/Cyclin B通路,降低CDC25C蛋白的表达,降低CDC2/Cyclin B1复合物的表达;化合物D36可以通过诱导激活caspase依赖的线粒体凋亡途径,提高剪切的PARP/PARP蛋白,剪切的caspase 3/caspase 3蛋白和剪切的caspase 9/caspase 9蛋白的比率,提高Bax蛋白和P21蛋白的表达以及降低Bcl-2蛋白的表达;D36还可以降低BRD4蛋白和C-Myc蛋白的表达,通过对肺癌细胞BRD4敲减实验和过表达实验,确证化合物D36为BRD4抑制剂。通过体内裸鼠实验证明D36的抑瘤效果。结论:D9、D66具有一定的抗动脉粥样硬化作用;D36是一个有效的抗非小细胞性肺癌的候选小分子化合物。
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目的:基于超高效液质联用技术（UPLC-MS）技术,分析菊三七水煎剂灌胃大鼠的血清内源性代谢物,并进一步深入研究菊三七致大鼠肝脏损伤对血清胆汁酸代谢的影响,为后续应用UPLC-MS技术进行相关体内代谢物检测提供参考与支持,同时为研究菊三七毒性机制奠定基础,为临床早期诊断提供一定的依据。方法:1.应用超高效液相色谱与线性阱-静电场轨道离子阱质谱联用（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）技术,对
1目的本研究以经典名方葛根芩连汤为研究对象,采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS技术快速分析鉴定葛根芩连汤中化学成分和入血成分,系统地阐明葛根芩连汤的药效物质基础;进一步运用网络药理学的方法,探究葛根芩连汤治疗急性肠炎的作用机制,包括揭示其关键成分、靶点和调节的通路等;最后建立葡聚糖硫酸钠诱导的急性肠炎大鼠模型,筛选预测的关键成分,对其药效和作用机制进行实验验证。希冀能为葛根芩根芩连汤的物
目的:进行具有二氧化硫特异性响应的荧光探针设计,并研究其与二氧化硫特异性反应后,荧光、紫外-可见光谱的变化特征,建立适合于中药材中二氧化硫残留的定性检测、定量测定方法,并将其用于动物机体内亚硫酸根离子的荧光成像检测。方法:（1）通过羟醛缩合反应合成基于肉桂醛荧光母核的荧光探针I和基于半花菁荧光母核的荧光探针Ⅱ。（2）考察荧光探针I和Ⅱ在水溶液中与SO32-反应后的紫外-可见光吸收以及荧光图谱变化,
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目的:肥胖症作为一种慢性疾病近年来在全球范围内迅速发展。肥胖往往会伴随着瘦素抵抗、胰岛素抵抗,肝脏脂肪变性,糖脂代谢紊乱等症状,长期发展会引起各种代谢性疾病,如糖尿病、脂肪肝,高脂血症等,从而影响个人及社会的健康和经济发展。目前被FDA批准用于临床的减肥药物不仅疗效差,而且副作用大。研究表明下丘脑是人体调控摄食和能量代谢的中心,其弓状核、室旁核等神经元核团中均含有调控摄食和能量的神经元。因此,我们
目的:PPAPs类天然产物在抗病毒、抗肿瘤等方面表现出良好活性,而这类化合物有绝对构型确定和分离提取困难等方面的问题。为解决这类化合物的构型和来源问题,本文提出用合成的方法确定这类PPAPs类化合物的绝对构型,建立一种适用性广的方法学快速合成这一类带有手性侧链的B型PAPPs类化合物;合成出一系列这些PPAPs类天然产物及类似物,测定生物活性,探究其构效关系,同时为寻找结构更简化、活性更好的先导化