【摘 要】
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目的:中药提取物中广泛存在纳米粒,但这些纳米粒对中药提取物中活性成分药动学的协同作用尤其协同机制尚不清楚。由于自身较差的溶解性和显著的首关消除,黄连主要活性成分小檗碱口服生物利用度低至不足1%。但本课题组在前期研究中发现,当以黄连提取物给予小鼠后,小檗碱的体内暴露水平较等剂量单体小檗碱给药组高15倍以上。黄连提取物中其他成分的协同作用可能是小檗碱药动学改善的原因。本课题组在黄连提取物中发现了大量主
【基金项目】
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上海自然科学基金课题---中药提取物中初级代谢产物促进活性小分化合物肠道吸收的机制研究—以黄连为例（17ZR1430400）；
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目的:中药提取物中广泛存在纳米粒,但这些纳米粒对中药提取物中活性成分药动学的协同作用尤其协同机制尚不清楚。由于自身较差的溶解性和显著的首关消除,黄连主要活性成分小檗碱口服生物利用度低至不足1%。但本课题组在前期研究中发现,当以黄连提取物给予小鼠后,小檗碱的体内暴露水平较等剂量单体小檗碱给药组高15倍以上。黄连提取物中其他成分的协同作用可能是小檗碱药动学改善的原因。本课题组在黄连提取物中发现了大量主要由植物蛋白形成的天然纳米粒（natural nanoparticles,Nnps）,并且这些纳米粒与小檗碱药动学改善有关,但尚未以实验直接证实且机制不清楚。为此,本论文拟基于药代动力学,综合采用多种药学相关方法与技术,考察黄连提取物中大分子成分所形成的天然纳米粒对小檗碱药动学的影响,并系统研究其促进小檗碱肠道吸收的机制。方法:（1）制备与鉴定。结合离心、过滤、膜透析等方法分离、制备出黄连中Nnps,采用扫描电镜观察其形态,利用动态光散射粒径仪测定其尺寸及Zeta电位,利用液质联用方法测定其主要黄连生物碱含量,分别采用二喹啉甲酸（bicinchoninic acid,BCA）及苯酚硫酸法测定其蛋白、多糖含量。（2）协同作用评价。利用离体肠囊确定Nnps对小檗碱体外肠吸收的影响;设计小鼠整体药动学实验,确定Nnps对小檗碱体内肠道吸收及暴露水平的影响。（3）协同机制研究。通过粉末X射线衍射法及差示扫描量热法确定对小檗碱存在形式的影响;基于Caco-2细胞实验确定Nnps摄取机制;评价Nnps对小檗碱溶解性、胃肠溶出度的影响;基于离体肠囊及MDCK-MDR1细胞研究其对小檗碱肠道摄取、外排的影响;开展肠S9代谢实验确定Nnps对小檗碱肠道代谢的影响;通过淋巴抑制剂确定Nnps是否促进小檗碱经由淋巴通路进入体循环。结果:从黄连中分离所得Nnps主要为圆球形,平均粒径约为166.6 nm,Zeta电位为-12.5 m V,蛋白质含量约为92.7%,小檗碱含量约为8.0%。离体肠实验结果表明,Nnps可显著促进小檗碱肠道吸收（p＜0.01）。小鼠药动学实验结果表明,Nnps可显著提高小檗碱在门静脉和肝脏中的暴露水平（均p＜0.01）。上述结果表明,Nnps对口服小檗碱具有促吸收、改善生物利用度的作用。粉末X射线衍射及差示扫描量热法实验表明,Nnps可使小檗碱的特征峰消失,表明影响了小檗碱存在形式,即由晶体转变为无定形态。Caco-2细胞研究结果表明,Nnps主要经由胞膜窖介导的内陷胞饮机制摄取（p＜0.01）。Nnps可显著提高小檗碱溶解性（2.97±0.34mg/m L vs 4.36±0.08 mg/m L,p＜0.01）;将小檗碱在人工胃、肠液中15 min的溶出度分别由7.5%、1.8%提高至54.6%及22.6%（均p＜0.01）。肠S9代谢实验结果表明Nnps可抑制小檗碱代谢消除及代谢产物去亚甲基小檗碱的生成（p＜0.01）。基于MDCK-MDR1细胞的小檗碱外排实验及离体肠外排实验均表明,Nnps能减少P-糖蛋白介导的小檗碱外排（均p＜0.01）。Nnps可促进部分小檗碱进入肠道派氏结。此外,放线菌酮可降低Nnps给药组小檗碱在体循环中的暴露水平约30%(AUC0-12h,271.6 ng·h/m L vs 389.1 ng·h/m L),提示Nnps可促进部分小檗碱吸收后经由淋巴通路进入体循环。结论:黄连提取物中Nnps可改变小檗碱存在形式及摄取机制,并进而通过改善小檗碱溶解性及溶出度、抑制肠道代谢及外排、促进淋巴通路转运等机制促进口服小檗碱肠道吸收、提高其体内暴露水平。
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